第八章 现代酶工程技术PPT.pptVIP

（a）分批式搅拌罐反应器； （b）连续式搅拌罐反应器； （c）连续流动搅拌罐一超滤膜反应器； （d）填充式反应器； （e）循环反应器； （f）流化床反应器。 Flash1 L—苹果酸是一种重要的有机酸，在医药和食品工业中有广泛用途。L—苹果酸生产途径有（1）用葡萄糖直接发酵：（2）用延胡索酸为原料酶法合成；目前国内L—苹果酸工业化生产主要是用延胡索酸为原料的酶法合成。普遍使用的包埋载体是卡拉胶（K—carrageenan）。 (四） L-苹果酸生产 ①黄色短杆菌发酵 离心收集菌体 ②卡拉胶制备 混合、切块 ③延胡素酸钠 装柱 苹果酸钠 苹果酸钙 苹果酸 固定化细胞生产L—苹果酸流程 （一）菌种培养 1．菌种 黄色短杆菌（Brevibacterium flavum），购于中科院微生物所菌种保藏室。斜面和平板培养基为普通肉汤琼脂培养基。菌落呈金黄色，圆形，直径1mm左右，表面光滑，湿润。 2．菌种筛选和保藏 通过平板划线法进行优良菌种的分离、筛选，再从平板上挑选单菌落接于试管。试管菌种于37℃培养24h，放置4℃冰箱保存，2~3个月转接一次，也可用石蜡封存，放4℃冰箱可保存1年左右。 3．一级摇瓶种 培养基配方：柠檬酸氢二胺2.5%，硫酸镁0.05%，磷酸二氢钾0.2%，玉米浆5%，pH7.0，500毫升三角瓶装液100毫升，于121℃灭菌30min，。严格无菌操作，30℃，摇瓶转速150r/min，培养18~24小时。 4．二级摇瓶种 培养基和操作条件同上，每瓶一级摇瓶种接10瓶二级摇瓶种。放双层工业往复式摇瓶机上摇瓶。培养24小时后并入一大瓶中，准备接入种子罐。 5．种子罐 种子罐体积500L，为标准通气搅拌式发酵罐。装料300L。操作要点：检查罐清洁程度，加去离子水200L，启动搅拌，然后加入上述原料，用液碱调pH7.2。按发酵常规灭菌，夹套冷却至30℃（罐内保持正压），用压差法将菌种接入种子罐内。转速180r/min，通气量1：0.3，温度30℃，罐0.02~0.05MPa，24小时后，接入发酵罐内，同时留样测定酶活力。 （二）发酵 发酵罐为7m3的标准式发酵罐，装料4m3。培养基，灭菌条件同种子罐。发酵罐转速100r/min，罐温30℃~32℃，罐压0.03MPa，通风量1：0.2，发酵时间约40小时。20小时后，每隔4小时检查菌体生长情况和测酶活力，pH8.6左右，放罐。 （三）菌体收集 发酵结束后，用管式高速离心机收集菌体。广州重型机械厂生产的GF—105（B）管式离心机，转速可达10000~12000r/min，转筒直径为100mm，管式离心机是由转鼓，分离盘，机壳，机架，传动装置等组成(图11-3)。 （四）菌体包埋 （1）卡拉胶熔化 生理盐水500Kg，卡拉胶20Kg，加入1.5m3的搪瓷罐中，开搅拌，夹套加热，升温到100℃，保温10min，卡拉胶彻底熔化。降温到50℃，夹套保温备用。 （四）菌体包埋 （2）混合 湿菌体114Kg，加100Kg生理盐水放另一搪瓷罐中混匀，保温45℃，然后压入卡拉胶罐中，恒温45℃，搅拌10min。 （四）菌体包埋 （3）凝固、切块 用衬胶铁箱装混合液，每只约装30Kg左右，占铁箱体积一半，冷却凝固后，加0.3mol/L KCl浸泡，放4℃冷库过夜，手工切成3-4mm正方体小块。 （五）提高酶活力 1．? 配料 酶块约700Kg，延胡索酸钠盐（1mol/L）1750L，胆酸6Kg，去离子水100L。 2．操作步骤 （1）将6Kg胆酸加入100L去离子水中，用20%NaOH调pH到7.0。 （五）提高酶活力 （2）1mol/L富马酸钠配制：市售富马酸为固定结晶，不溶于水，分子量为116。在搪瓷罐中加富马酸203Kg，水1000L，搅拌，用液碱调pH至6.5~7.0左右，溶