厌氧培养简介标本采集和运送和鉴定课件.pptVIP

目的要求 1.掌握厌氧菌概述 2.熟悉检验 3.掌握破伤风杆菌和产气荚膜杆菌 临床意义 由厌氧菌感染在人类感染疾病中占相当大的比例，如脑脓肿，牙周脓肿，口腔脓肿80%以上由厌氧菌引起，可以是单独，也可与兼性厌氧菌或需氧菌混合感染。 （一）厌氧菌感染的条件 组织缺氧或氧化还原电势降低均可造成厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易遭受厌氧菌感染，原因很多，如局部组织供血障碍，见于血管损伤，肿瘤压迫，烧伤，动脉硬化，组织水肿，梗死，有异物。大面积烧伤，刺伤亦可。 厌氧菌进入适当的生长繁殖部位，大量繁殖和损伤组织。坏死组织吸收余氧，进一步降低氧化还原电势，更有利于繁殖，产生内、外毒素，侵袭性酶、酸类、气体及其他毒性产物，造成组织进一步损伤、坏死和全身中毒。 在厌氧感染中，大部伴有需氧或兼性厌氧菌感染 经皮肤粘膜采集标本时，局部消毒，多使用针管抽取，减少与空气接触的机会，抽取时穿刺针头应消毒刺入病变部位，一般抽3~4ml,若病变液体少，先抽取还原液或还原肉汤注入病变部位，再抽取。 钢末法：将钢丝绒、钢末浸入酸性硫酸铜溶液中，其表面形成一层金属铜，这种铜铁结合物极易吸收氧而被氧化。使罐内无氧。 以上有指示剂美蓝，无氧为白色，有氧为蓝色。 4.鉴定 一般取伤口分泌物作涂片镜检，其典型鼓槌状菌体有鉴定意义。必要时进行细菌培养，并用动物保护试验作最后鉴定。有条件时，可用气液相色谱检测其主要代谢产物协助早期快速诊断。 本菌可产生外毒素及多种侵袭性酶类。外毒素有α、β、γ等12种。各有不同的毒性作用，其中最重要的α毒素，为卵磷脂酶，引起溶血、组织坏死和血管内损伤，使血管道通透性增高造成水肿。同时α毒素还能促使血小板凝聚，血栓形成，局部组织缺血。β毒素可引起人类坏死性肠炎。ε毒素有坏死和致死作用。θ毒素有溶血和破坏白细胞的作用，对心肌有毒性作用。 在牛乳培养基中能分解乳糖产酸产气，使酪蛋白凝固，气体将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状。并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”（stormy fermentation）。 3．标本直接检查　G＋粗大杆菌，伴有其它杂菌，白细胞较少形态不规则，是气性坏疽直接涂片的特点，对早期诊断及时防治有重要意义。 （二）?? 临床意义 广泛存在于自然界，土壤中尚可检出，偶尔存在于动物粪便。本菌在厌氧条件下产生极强毒性的肉毒毒素，嗜神经性，导致肌肉麻痹，从眼部肌肉发展至呼吸肌。除E型外，一般无胃肠道症状。发病主要是食入引起，引起食物中毒，有毒素型和食物型。 7. 气液相色谱 气液相色谱技术（GLC）是一种以气体或液体为流动相，以涂固定液的载体为固定相。采用冲洗法的柱色谱分离技术。目前用来分析细菌终末代谢产物，结果可靠。 8．PCR、基因探针。 （四）检验结果分析与报告 根据革兰染色镜检、菌落性状、耐氧试验若发现厌氧菌可初步报告“检出厌氧菌，形似××菌”。再根据生化反应及终末代谢产物作最终报告。分离鉴定什么菌及药敏试验结果。 ? 第六节?? 梭状芽胞杆菌属 厌氧芽胞杆菌(anaerobic sporeforming bacilli)只有一个属，简称梭杆菌属(Clostridum)，130个种，G＋但在陈旧培养物中G－，芽胞正圆形或卵圆形，直径大于菌体横径，位于菌体中央、极端或次端，使菌体膨大呈梭状而故名。本菌属在自然界分布广泛，常存在于土壤、人和动物肠道及腐败物中，多数为腐物寄生菌。其中不少菌可用于生物工程技术，发酵商业和工业所需的有机溶剂、酸类，少数为致病菌，能分泌外毒素和侵袭性酶类，可使人和动物致病。 一、破伤风梭菌 (C.tetani) （ 一）?? 临床意义 广泛存在于自然界，在人和动物肠道肠道中都存在。当机体受伤或新生儿不清洁断脐时，引起机体强直性痉挛、抽搐，称为破伤风。全世界每年有100万病例发生，病死率20%。新生儿破伤风又称脐带风，病死率高达90%。 本菌主要是感染方式是通过创伤，如烧伤、外伤切口缝合，特别是深而窄的伤口，夹有泥土，局部坏死，组织多伴有其他化脓性感染，造成局部组织氧化还原电势降低，细菌繁殖产生毒素，细菌本身不侵入血流。该毒素对脊髓前角运动细胞有高度的亲和力，与神经节苷脂结合，封闭了脊髓抑制触突，从而阻止了抑制性触突未端释放抑制性冲动的传递介质。 出现屈肌收缩伸肌也收缩，即痉挛。初期