普通可食用坚果种子的抗氧化与抗增殖活性.pptVIP

胡桃，山核桃和花生的水溶性游离提取物对细胞增殖抑制呈剂量依赖性的关系； 这10个样品的抗增殖活性在HepG2细胞和Caco-2细胞上有所不同。 总的来说，这10个样品抑制Caco-2结肠癌细胞增殖比抑制肝癌HepG2细胞增殖有更大的能力。 对HepG2 和Caco-2抑制的比较 通过坚果提取物抑制癌细胞的增殖能力能够部分地解释是由于提取物的总酚的作用，这表明一个特殊的酚类化合物或坚果类的酚类是负责其抗增殖活性的。 特别的酚类化合物与其他化合物在发挥抗增殖活性的作用中可能是充当相加地，协同作用地，和/或拮抗作用。 酚类，抗氧化活性，抗增殖活性之间的关系 酚类，抗氧化活性，抗增殖活性之间的关系 坚果总酚含量的可溶性游离酚类和总的抗氧化活性以及可溶性游离黄酮含量和总的抗氧化活性之间有直接的关系。 用可溶性游离酚/黄酮含量和中值有效剂量（EC50）与HepG2和Caco-2细胞增殖的抑制作比较，肝癌细胞增殖的抑制和可溶性游离酚含量和可溶性游离黄酮含量之间存在弱相关性。 在所测试的坚果总抗氧化活性和HepG2细胞的抗增殖活性之间没有显著线性关系。同样地，Caco-2细胞增殖的抑制性和可溶性游离酚含量，可溶性游离黄酮含量，总抗氧化剂之间呈弱的相关性。 六、展望 目前关于酚类化合物的研究都是在其理化性质上，对于人体肠道的吸收研究很少 多酚类化合物在安全性评价方面研究很少 图表布局有待改进 * 常见可食用坚果的抗氧化和抗增殖活性 目录 一、研究进展 二、研究目的 三、研究内容 四、实验内容 五、实验总结 六、展望 一、研究进展 坚果是不饱和脂肪酸，蛋白质，纤维，微量营养素，维生素，和植物化学物质丰富的来源，不同的坚果含量水平不同。 坚果是植物化学物质的一个很好的来源的，包括酚类（丹宁酸，鞣花酸，和姜黄素），黄酮（木犀草素，槲皮素，杨梅素，山柰酚，和白藜芦醇），大豆异黄酮（木黄酮和大豆黄酮），萜类化合物和维生素E 。 一、研究进展 坚果对人类健康的作用： 1、有利的脂肪酸： A-亚麻酸抗心律失常，饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸有利于葡萄糖和胰岛素动态平衡 2、抗氧化活性 3、修复DNA损伤 4、减少肿瘤的引发或促进细胞的调控分化和增 殖 5、免疫学活性的调控和炎症反应的调节 二、研究目的 坚果中成分的潜在作用机制可能是在对癌症的预防还没有完全被研究出来。 到目前为止，关于坚果的研究被大部分重点放到了脂质方面。 很少的研究被集中到了坚果的植物化学物质上，甚至很少注意到坚果的抗氧化性和抗增殖活性。 三、研究内容 （1）确定总酚的形态，包括坚果中可溶性游离酚和结合酚 （2）测定总抗氧化活性 （3）评价坚果的抗增殖活性对人类肝癌和结肠癌细胞的作用 （4）探讨抗氧化性或抗增殖活性和总酚和类黄酮含量的相关性 四、实验内容 材料：（+）-儿茶素，亚硝酸钠，福林 - 乔卡梯奥试剂（FCR）， 盐酸，胰高血糖素，氢化可的松，胰岛素，和KMBA，氯化铝，氢氧化钠，甲醇和丙酮，没食子酸，2,20 - 偶氮-异丁基脒（ABAP） 九常食用坚果(杏仁、巴西坚果、腰果、榛子、澳洲坚果、山核桃、松子、开心果和胡桃) 和花生 提取流程图 方法 1、游离水溶性植物化合物的提取 25g坚果+200g 80%预冻丙酮（1:8 w/w） →→混匀搅拌5min→→均质5min→→抽滤→→45℃浓缩→→50%甲醇/水→→50mL正己烷除脂→→离心10min→→去正己烷层→→除脂两次→→45℃浓缩→→超纯水定容至10mL→→分装至2mL离心管→→-40℃储存备用。 方法 2、植物化学物质结合物的提取 取10g残渣→→充氮除氧，密封→→ 40mL4mol/L NaOH消化1h→→浓盐酸中和至中性→→取10mL溶液→→过硅胶柱（1:2 v/w）→→ 200mL 20%甲醇/乙酸乙酯洗脱→→洗脱液在45℃浓缩至干→→超纯水定容至10mL→→分装至2mL离心管→→-40℃储存备用。 方法 3、总酚含量测定：Folin-Ciocalteu比色法 所有提取物与蒸馏水以比例1:10稀释（制定没食子酸0.0-800.0mg/mL标准曲线） → → Folin-Ciocalteu试剂氧化→碳酸钠中和→ →常温下反应90min后→ → 760nm测吸光度，与已知的没食子酸标准曲线比较。 方法 4、总黄酮含量的测定 取0.25mL的提取物稀释10倍→→0.075mL 5%亚硝酸钠反应5min→→0.15mL10%氯化铝反应6min →→0.5mL1mol/L氢氧化钠→→加蒸馏水至3mL→→在510nm用MRX II Dynex分光光度计测定该混合物的吸光度 黄酮的含量通过儿茶素标准曲线比较得到，平行测定三次，结果用（每一百克坚果中儿茶素当量）