动物繁殖学_4课件.ppt

三、精液的稀释与保存 （一）稀释的目的：扩大精液量,延长寿命,利于保存,抑制微生物 所谓稀释：指在采得精液里，添加一定数量的、按特定配方配制的、适宜于精子存活并保持受精能力的溶液。 （二）稀释液的主要成分和生理作用 1、稀释剂：主要扩大精液容量。 2、营养剂：主要是提供营养：葡萄糖.果糖.乳糖.鲜奶.卵黄 3、保护剂：主要保护精子免受不良因素的危害 ①缓冲物质：适当的PH值。酸性缓冲剂有：柠檬酸钠、酒石酸钠、磷酸二氢钾、硫酸二氢钠等。 ②非电解质和弱电解质：降低精清中电解质浓度的作用。因电解质电离度高,能激发精子,并促精子早衰,破坏膜,使精子失去电荷而凝集。所以应加各种糖类，弱电解质，如甘氨酸等。 ③防冷刺与抗冻保持质：防冷休克和增强抗冻力。 防冷：缩醛磷脂等。抗冷：甘油.二甲基亚矾等。 ④抗菌物：有抗菌作用。青链霉素、氨苯磺胺。 4、其他添加剂：酶类、激素类、维生素类等，有利于改善精子所处的环境，以提高受精机会。 （三）稀释液的种类 1、现用稀释液:以扩大容量为目的。加入等渗的糖和奶液为主 2、常温保存稀释液:短期保存,以糖和弱酸盐为主,PH偏酸。 3、低温保存稀释液:低温保存,含卵黄或奶液为主,抗冷休克。 4、冷冻保存稀释液:超低温保存,甘油.二甲基亚砜.乙二醇,抗冻 （四）稀释液配制的基本技术原则 1、配稀释液的药物原料品质要纯净(化学纯和分析纯),准确称量 2、配制和分装稀释液的物品用具,事先都须洗干净和严格消毒 3、各种药物原料用水溶解后要过滤,以除去杂质,尔后进行消毒 4、配好的稀稀液如不现用,应注意密封保鲜,不受污染。 5、认真检查配好的成品,经常进行精液的稀释.保存效果的测定 （五）精液稀释倍数与方法 1.倍数:据射精量.配方要求.保存方法.保存时间与有效精子数定 2.方法:采精后立即进行,应作好稀释前的各种准备工作。稀释时,应将稀释液沿杯壁加入精液中,然后混匀,若高倍稀释(20-30倍),应分两步进行。稀释完后,应作活率检查。 （六）精液的保存方法 1、常温保存：15-25℃ 存活3-7天 理论依据:加抑制剂,使处于半休眠状态。 常温保存稀释液配方: 牛：2水柠檬酸纳2g·kd0.04g,氨苯磺胺0.03g, 无水碳酸钠0.21g,葡萄糖0.3g ,蒸溜水100ml 将之混合,二次过滤,冷却加青链各100IU/ml, 再加100%卵黄液,再行稀释(1:3~4),之后保存。 2、低温保存：0-5℃ 存5-9天。 稀释后，渐降温，在冰箱中存放慢温。配方略。 3、超低温保存：-196℃、颗粒法、塑料细管 也叫精液的冷冻保存。 四、冷冻精液制作 （一）冷冻保存机理： 1、冷冻现象及对精子的作用。 冷冻是寒冷对机体作用的第二阶段。精子在0~-60℃时就易死亡 原因有： （1）冷冻时,精子外变成高渗液而脱水,而电解质升高,PH也失调 （2）冰晶形成,对精子产生机械压力,原生质破坏,失去保护作用 （3）冰晶能渗入精子内,破坏精子结构。 （4）精液冻结时,促进胶体凝固而破坏其胶体结构。 但冰晶形成是有条件的(0~-60℃),否则不形成冰晶,而成玻璃化 玻璃化特点： A、水分子不进行重新排列。 B、分子无激烈运动,故无恒定冰点和不释放结晶热。 C、水溶液原均一的分散系也不遭破坏,即溶质浓度不变。 D、水分子自由能高于同温的结晶分子(不释放结晶热)。 液体在过冷溶液中,水分子可沿晶核界面形成很少的冰晶叫微晶 对精子的冷冻保存,不一定是完全的玻璃态,事实上,不可避免形成冰晶。但关键是冰晶大小,只要引起物理伤害的大冰晶不存在即可 2、危险温区及防冻保护剂的作用 甘油的抗冻作用： 一是减缓结晶,二降低危险温区上限(25%时可消除危险区) 原理：a.甘油有强的渗透性,进入细胞内代替部分水,使水.无机盐排出,降低了溶质浓度,可阻止在-150℃以下引起蛋白变性。 b.甘油进到精细胞内外,降低冰点,减缓细胞皱缩程度和脱水速度 c.由于甘油渗透到粘子细胞膜内，解冻时可避免渗透性损伤。 d.甘油保护谷--草转氨酶(GOT)免受冻害。GOT多,活率高。 e.有很强的亲水性,阻抑水结晶。 (二)冷冻技术： 1、牛精冷冻保存技术： 采精与精液检查:采后,检查容量.色泽.PH.活力.密度。 冷冻稀释液：一般包括，防冻保护剂、缓冲剂、抗生素等。 主要有：卵黄.柠檬酸钠.甘油液；卵黄.糖类.甘油液；奶类.甘油液等 精液稀释:1次稀释法