通道在慢性低氧性肺动脉平滑肌细胞中的功能性表达（PPT24）课件.pptVIP

TRPV通道在慢性低氧性肺动脉平滑肌细胞中的功能性表达 Functional Expression of TRPV Channels in Chronically Hypoxic Human Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells 首都医科大学 呼吸生理与病理生理研究室 首都医科大学 附属北京朝阳医院 王跃秀 王军 王辰 * 一、研究背景 肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的增殖是低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension , HPH)发生发展过程中的重要病理生理学改变，其与平滑肌细胞内钙离子密切相关。 * 细胞内钙稳态 Calcium Homeostasis [Ca 2+]cyt SR VDCC ROC SOC 受体操纵性通道 ROC receptor-operated channel 电压依赖性钙通道 voltage-depended calcium channel 钙库操控性通道 store-operated channel, SOC * 在PASMC上VDCC并不发达，其阻断剂不能完全阻止钙离子内流； 在离体情况下，阻断ROC的功能后，对慢性低氧诱导的PASMC的高Ca2＋浓度并没有明显作用。 低氧性肺动脉高压的PASMC细胞中，Ca2＋浓度增高不能完全被VDCC的阻断剂所阻断，但能被SOC的阻断剂明显抑制。 Remillard CV, Yuan JX. TRP channels, CCE, and the pulmonary vascular smooth muscle. Microcirculation. 2006,13:671-692. Cioffi DL, Wu S, Stevens T. Transient receptor potential cation channels and store-operated Ca channels. Boca Raton, FL: Taylor Francis Group. 2005, 125-146. Landsberg JW, Yuan JX. Calcium and TRP channels in pulmonary vascular smooth muscle cell proliferation. News Physiol Sci . 2004, 19:44-50 . * SOC可能是低氧时肺动脉平滑肌细胞调节钙离子跨膜转运的重要途径。 目前研究认为：瞬时受体电位( transient receptor potential, TRP) 蛋白家族中的成员组成了SOC。 * TRP通道的分类 TRPV TRPC TRPM TRPP TRPML TRPA TRPN TRPV (Vanilloid receptor related TRP) Subtype : TRPV1-6 * Firth AL, Remillard CV, Yuan JX. TRP channels in hypertension. Biochim Biophys Acta (2007) 1772:895-906 TRP通道的结构 TRP通道均为六次跨膜蛋白，其N末端和C末端均在胞内，由第五和第六跨膜结构域共同构成非选择性阳离子孔道。 * 大鼠的肺动脉和主动脉平滑肌上有TRPV通道家族成员(TRPV1-4)的分布; 在低氧下，人肺动脉内皮细胞中有TRPV1，TRPV2，TRPV4通道的表达; TRPV1在大鼠PASMCs表达并通过介导细胞外Ca2+内流而提高细胞内Ca2+水平。 Yang XR, Lin MJ, McIntosh LS, et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2006, 290:L1267-1276. Fantozzi I, Zhang S, Platoshyn O, et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2003, 285:L1233-1245. Minke B . Cell Calcium 2006, 40:261-275 TRPV通道在肺血管的研究 目前在人肺动脉平滑肌细胞上TRPV通道的研究未见报道 * 通过 RT-PCR, Real-time PCR检测 TRPV通道家族成员（TRPV1-6）的表达 人肺动脉平滑肌细胞 HPASMC RT-PCR, Real-time PCR 细胞 计数 细胞内钙测定 低氧肺动脉高压平滑肌细胞模型的建立 3%O2, 72h Western blot analysis 流氏细胞周期测定 二、技术路线 * 通过鉴别TRPV通道家族成员在人肺