甲状腺乳头癌中D2-40的临床与基础研究进展.pdfVIP

甲状腺乳头状癌患者其中男37例，女60例，年龄17．77岁，平均46．4岁； 淋巴结转移39例，无淋巴结转移58例；患者术前未经过任何抗肿瘤治疗，且无 甲状腺外侵犯及远处转移。组织学类型经病理证实为结节性甲状腺肿的患者259 例，设为对照组，其中男96例，女163例，年龄16．79岁，平均49．2岁。 二、试剂及相关设备 (一)所需试剂 mAb 自北京中杉金桥生物技术有限公司 甲醛，乙醇，二甲苯，苏木素，PBS缓冲剂等均由中国医科大学附属盛京医 院中心实验室提供。 (二)所需仪器 病理石蜡包埋机 LS．100 石蜡切片机 Leica 双目光学显微镜 Olympus 显微数码相机 Nikon E800 Eclipse ．80℃冰箱 三、组织切片的设计与制作 (一)载玻片的准备 用于承载组织切片的载玻片需经铬硫酸浸泡等处理，本次实验购买商品化载 玻片，无需处理直接使用。 (二)组织切片设计与连续切片 每例标本距经4％甲醛固定2h，脱水，透明，石蜡包埋。 常规连续石蜡切片(6岬)20．30张左右，置入二甲苯脱蜡8分钟，脱水，染 色，依次移至经防脱片处理的载玻片上，标清序号，常温保存备用。 四、免疫组化染色与结果判定 (一)免疫组化染色 液3min*3次。 2、抗原修复：将切片浸入0．01M柠檬酸缓冲液(PH7．0)中高压抗原修复， 达到压力负荷15min后，自然冷却。 3、阻断内源性过氧化物酶：3％过氧化氢室温孵育10min。 4、PBS冲洗3min*3次，滴加一抗：40C冰箱，孵育过夜。 5、PBS冲洗3min*3次，聚合酶辅助剂室温孵育20min。 30min。 7、PBS冲洗3min*3次，DAB显色镜下控制反应，蒸馏水终止反应。 8、苏木素核复染lmin，1％盐酸．酒精中分化数秒。自来水冲洗，0．2％氨水冲 洗(返蓝)。 9、脱水，透明_中性树胶封片_光学显微镜下观察。 (二)免疫组化染色结果判定 D2．40阳性染色呈棕黄色颗粒状，主要定位于淋巴管内皮细胞的胞浆和胞膜 上。阳性标记的淋巴管一般壁薄，形态不规则，管壁内无平滑肌并且淋巴管一般呈现 扩张状态，管腔内偶可见淋巴细胞。个别可呈现由几个内皮细胞构成的细胞续或闭 锁的条索状，甚至于单个内皮细胞。 微淋巴管的计数方法：由于D2．40能特异性的表达于微淋巴管，因此可根据 D2．40阳性染色的内皮细胞簇，或者单个内皮细胞来分别计数为一个阳性的淋巴 管。在显微镜下分别选取肿瘤中心区域及肿瘤边缘区域计数其微淋巴管的数目，每 例选取3．4个视野，并以其均值定为该例的微淋巴管密度。同理，计数癌旁正常常甲 状腺组织中的微淋巴管密度。 五、统计学分析 用SPSSl7．0统计软件进行处理分析，行，检验，P0．05视为差异有统计学 意义。 结 果 甲状腺乳头状癌中微淋巴管密度为9．53+2．79，明显高于结节性甲状腺肿的微 R 淋巴管密度2．49+1．06。转移组甲状腺乳头状癌癌组织边缘区的微淋巴管密度明显 高于未转移组癌组织边缘区(P0．01)，癌组织中心区和癌旁组织的微淋巴管密度与 未转移组间差别无统计学意义(P0．05)。 甲状腺乳头状癌中淋巴管内可见癌栓，大部分表面覆有淋巴管内皮细胞。甲 状腺乳头状癌淋巴结转移组有31例可见淋巴管内癌栓，未转移组有18例可 见淋巴管内癌栓，淋巴结转移与癌栓形成密切相关(贮=21．68，P0．01)。 附表 淋巴结转移与未转移的甲状腺乳头状癌患者MLVD 9 、、