禽病实验室诊技术书稿.doc

前 言 随着我国养禽业的迅速发展，新的疫病不断出现，发病几率也逐年提高，并且混合感染和疾病的非典型化越来越多，随之禽病诊断遇到的新问题也越来越多，传统的模糊诊断已不能满足生产需要，疾病的确诊最后还要依靠实验室检验。为此，编者在多位专家的指导下，广泛听取基层工作者的意见，并参阅国内外相关材料，结合多年的经验总结，编写了这本《规模化禽场禽病实验室诊断技术》。 全书共十一章。其中第一章至第六章，为禽病实验室诊断技术，包括实验室工作基本技术、培养基的制备技术、细菌的分离培养及鉴定技术、抗菌药物的敏感性及消毒药的筛选试验；第七章至第十章为家禽常见病的实验室诊断，包括常见细菌性疾病的实验室诊断、病毒性疾病的实验室诊断、其他微生物性病的实验室诊断和寄生虫病的实验室诊断；第十一章为饲料及饮水中微生物的检测。 编写本书旨在阐述诊断禽病的实验室基本操作技术，满足禽病工作者、实验室检验工作者，尤其是现代化养禽场禽病实验室检验工作者的需要。由于时间仓促，编者水平有限，定有不足之处，恳请批评指正，以便修订。 第一章 规模化禽场实验室的基本条件和工作技术 第一节 实验室的基本条件与结构 一、基本条件 禽病检验室通常包括实验室和无菌室包括无菌室外的缓冲间。这样划分并不是绝对的，可根据具体条件而定，但以下几个方面的条件是不可缺少的。对各室的共同要求是高度的清洁卫生，也就是要尽可能地创造无菌条件。为了达到这个目的，房屋的墙壁和地板、使用的各种家具都要符合便于清洗的要求。另外，检验室必须具备保证显微镜工作、微生物分离培养工作及基本化学工作顺利进行的基本条件。如： （1）光线明亮但避免阳光直射室内； （2）洁净无菌，地面与四壁平滑，便于清洁和消毒； （3）空气清新，应有防风、防尘设备； （4）要有安全、适宜的电源和充足的水源； （5）具备整洁、稳固、适用的实验台，台面最好有耐酸碱、防腐蚀的黑胶板； （6）显微镜及实验室常用的工具、药品应设有相应的存放橱柜。 二、无菌室的结构与要求 （一）无菌室的结构 无菌室通常包括缓冲间和工作间两大部分。为了便于无菌处理，无菌室的面积和容积不宜过大，以适宜操作为准，一般可为9~12m2。缓冲间与工作间二者的比例可为1：2．高度2.5m左右为适宜。工作间内设有固定的工作台、紫外线灯、空气过滤装置及通风装置；较为理想的应有空调设备、空气净化装置，以便在进行微生物操作时切实达到无尘无菌。工作间的内门与缓冲间的门力求迂回，避免直接相通，减少无菌室内的空气对流，以便保持工作间的无菌条件。窗户应装有两层玻璃，以防外界的微生物进入。 （二）无菌室的要求 1）无菌室内墙壁光滑，应尽量避免死角，以便于洗刷消毒。 2）应保持密封、防尘、清洁、干燥。 3）室内设备简单，禁止放置杂物。 4）工作台、地面和墙壁可用新洁尔灭或过氧乙酸溶液撩洗消毒。 5）杀菌前做好一切准备工作，然后用紫外线杀菌灯进行空气消毒。开灯照射30min后关灯，间隔30min后方可进入室内工作。 6）无菌室的大小，应按每个操作人员占用面积不少于3 m2设置。 （三）无菌室无菌程度的测定 一般采用平板法：将已灭菌的营养琼脂培养基分别倒入已灭过菌的培养皿内，每皿约15m培养基，启开皿盖暴露于无菌室内的不同地方，10min后，盖好皿盖。将培养皿倒置于37℃培养箱内培养24h后，观察菌落情况，统计菌落数。如果每个皿内菌落不超过4个，则可以认为无菌程度良好，若菌落数很多，则应对无菌室进—步灭菌。 实验室检验是一项精确、细致、耐心的工作，作为禽病诊断检验室的工作人员，在工作过程中既要遵守实验室的规则，防止污染，同时又必须注意安全，防止被病原微生物感染。在开展检验工作时，应该注意下列事项： 1. 进入实验室应穿着工作服，进入无菌室应戴口罩、帽子，换专用鞋。 2. 实验室内要保持安静、有秩序，不要高声谈笑，影响实验。不准吸烟、饮食和会客。 3. 病料检验要体现快而准的原则，采集或接到病料时应及时进行检查和病原分离培养。 4. 实验室应保持整洁和卫生。样品检验完毕后及时清理桌面，凡是要丢弃的培养物应经高压灭菌后处理，污染的玻璃仪器高压灭菌后再洗刷干净。器械使用后及时清洗干净并归纳整理，需要灭菌的器械应及时灭菌。药品和试剂使用后放回原处，有毒和腐蚀性大的药剂残液应妥善处理，不得污染环境。 5 . 实验室内应备有镊子、剪刀、接种针、接种环等，每次使用前和使用后应在酒精灯火焰上烧灼灭菌。 6. 实验室内应备有盛放3％来苏尔或5％石炭酸溶液的玻璃缸，内浸纱布数块；备有75％酒精棉球，用于样品表面消毒及意外污染消毒，无菌室每次使用前后，用紫外线灯照射。 7. 当致病性病原微生物材料污染台面、地面、衣着和器械时，应立即用3%的来苏尔或5%的石炭酸液消毒。如手指或皮肤被污染，应立即用0.1%的新洁