实验_维生素B1片含量测定方法验证.pptVIP

实验八 维生素B1片含量测定的方法验证 设计性实验 实验原理 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐 性 质 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 硫色素反应： 紫外吸收特性：Amax=246nm 与生物碱沉淀试剂反应 氯化物特性： 原理 特征性鉴别——硫色素反应 维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物分析》第六版，P258） 含量测定 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm， 实验方法 鉴别反应 取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。 含量测定 精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液1.0ml，置25ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 测 A246， 用吸光系数计算浓度。 实验内容与要求 鉴别试验 吸收波长选择 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD% 重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD% 稳定性试验：考察样品溶液1h内的稳定性，计算RSD% 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。 分析方法的验证 线性与范围 目的 范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度或量的区间 线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度 要求 至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。 线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r 0.99；HPLC法，r 0.999 列出回归方程、相关系数和线性图 线性关系考察(示例） 精密度试验 目的 检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度 要求 用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内 RSD 2.0% ……仪器分析 精密度试验（示例 ） 重现性试验 目的 考察样品溶液制备方法的可靠程度 要求 同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 RSD 2.0% ……仪器分析 重现性试验(示例) 稳定性试验 目的： 考察样品溶液制备后多少时间内稳定 要求 要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积。 RSD 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%，否则要尽快测定 稳定性试验(示例) 加样回收率试验 目的 考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 要求 设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率 RSD 2.0% 加样回收试验 撰写方法学验证论文 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 精密度试验 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 重复性试验 加样回收试验: 设计称样量、对照品加入量 含量测定：根据实验测定数值进行计算 * 药物分析实验 特征性鉴别 含量测定 氯化物检查 如何计算出所需要的量？ 稀释倍数？ 如何引用？ 线性关系和范围 1 精密度试验 2 重现性试验 3 加样回收试验 4 稳定性试验 5 0.636 0.536 0.436 0.336 0.236 测定值 0.06250 0.05000 0.03750 0.02500 0.01250 浓度 （mg/ml） 5 4 3 2 1 序号 0.510 5 0.509 6 0.509 4 0.511 3 0.508 2 0.2% (2.0%) 0.510 0.512 1 RSD 平均值 信号值 实验 序号 … … … 5 … … … 6 … … … 4 … … … 3 … … … 2 0.3% 2.0% 60.0 60.0 30.0 0.5000 1 RSD （%） 平均含量（ mg/g ） 含量 （mg/g） 测定值 （mg） 称样量 （g） 试验 序号 同批、同法 ( 2.0%) RSD （%）