实验二 油镜的使用、细菌的单染色与革兰氏染色.pptVIP

实验二 油镜的使用、细菌的单染色及革兰氏染色 （一)、油镜的工作原理 增加照明强度 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，降低了视野的照明度；若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 增加显微镜的分辨率： D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) D：分辨率 NA：物镜的数值孔径值 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率 ?：镜口角（即入射角） 显微观察 低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察 在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中。 显微镜用毕后的处理 上升镜筒，取下载玻片； 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量乙醇乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的乙醇乙醚洗液； 用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件； 将镜体各部分复原。 （二）简单染色法 目的要求 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法； 初步认识细菌的形态特征； 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。 基本原理 借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。 实验器材 菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物 染色剂 草酸铵结晶紫染液 番红染液 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。 实验结果 根据观察结果，绘出细菌形态图。 思考题（书P28五、2.（2）（3）） 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？ 如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？ （三）革兰氏染色法 目的要求 学习并初步掌握革兰氏染色法； 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 实验器材 菌种 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物 染色剂 草酸铵结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 番红染色液 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。 实验结果 列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。 思考题（书P30五、2.（1）（2）（6）） 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。 你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？ 操 作 步 骤 涂 片 干 燥 固 定 染 色 镜 检 水 洗 干 燥 操 作 步 骤 藤黄八叠菌纯培养的镜下形态（革兰氏染色） 大肠杆菌纯培养的镜下形态（革兰氏染色） 革兰氏鉴定 颜 色 形 态 菌 种