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第7章　　分子发光分析法 7.1 内容提要 7.1.1 基本概念 分子发光分析法——分子吸收一定的能量跃迁到较高的电子激发态后，在返回基态的过程中伴随有光辐射，这种现象称为分子发光，以此建立起来的分析方法称为分子发光分析法。 光致发光——物质吸收光能而激发发光的现象，称为光致发光。 电致发光——物质吸收电能而激发发光的现象，称为电致发光。 化学发光——物质若吸收化学反应能激发发光，称为化学发光。 生物发光——发生在生物体内有酶类物质参与的化学发光称为生物发光。 单重态——一个所有电子自旋都配对的分子的电子态称为单重态，用“S”表示。 三重态——在激发态分子中，两个价电子自旋平行的电子态称为三重态，用“T”表示。 图1 ????单重态系三重态激发示意图 图7-2分子荧光、磷光光谱产生过程示意图 斯托克斯位移——分子发射荧光的波长总比激发光长，能量比激发光小，这种现象称为斯托克斯位移。 分子磷光——当受激分子降至S1的最低振动能级后，如果经系间窜跃至T1态，并经T1态的最低振动能级回到S0态的各振动能级，此过程辐射的光称为分子磷光。 延迟荧光——某些物质的分子跃迁至T1态后，因相互碰撞或通过激活作用又回到S1态，经振动驰豫(VR)到达S1态的最低振动能级再发射荧光，这种荧光称为延迟荧光，也叫慢速荧光。 荧光激发光谱——固定发射光（第二单色器）波长，改变第一单色器（激发光）波长，获得以激发光波长为横坐标，荧光发射光强度为纵坐标的谱图，即为荧光激发光谱。 荧光发射光谱——固定激发光（第一单色器）波长，使激发光波长和强度保持不变，然后改变第二单色器（荧光发射）波长，从200～700nm10-15～10-12sECL）。 重原子效应——荧光分子的芳环上被F，Cl，Br，I 当测定体系和测定条件确定之后，，，以及摩尔吸收系数k和液层厚度L均为常数，设，则 荧光分析是微量组分或痕量组分分析法，当荧光物质的浓度增至吸光度A(A=kcL)≥0.05时将产生显著的浓度效应，使荧光强度If与浓度c的关系偏离线性。 （2）荧光与分子结构 通常，强荧光分子都有大的共轭(键结构、给电子取代基和刚性平面结构等，而饱和的化合物及只有孤立双键的化合物，不呈现显著的荧光。 （3）荧光猝灭 荧光猝灭分为静态猝灭和动态猝灭。静态猝灭的特征是基态荧光分子M和猝灭剂Q发生反应，生成非荧光性物质MQ，使M失去荧光特性： M + Q MQ 动态猝灭的特征是激发态M(和Q碰撞，发生能量或电子转移从而失去荧光性，或生成瞬时激发态复合物MQ(，使荧光分子M的荧光猝灭。与静态猝灭不同，动态猝灭通常并不改变M的吸收光谱。 (ex MM( + Q MQ( MQ(无辐射跃迁) 或 MQ + (em(荧光) （4）温度、酸度和溶剂的影响 温度降低，和If均增大。荧光物质如果是弱酸或弱碱，pH的改变会影响其形体分布和荧光强度，因此，可以用控制酸度的办法提高荧光分析的灵敏度和选择性。 溶剂的改变会使荧光物质的发生变化，或导致其他副反应的发生，既是有利因素也是不利因素。 （5）表面活性剂的影响 在水溶液中，当单体表面活性剂浓度增大到临界胶束浓度（CMC）时，便会缔合为球状胶束，它的存在使荧光分子处在胶束溶液更有序的微环境中，对荧光质点起到了保护作用，降低了荧光猝灭和非辐射去激，使明显增大。胶束增敏作用具有较强的选择性。 5. 荧光分析仪器 荧光分析仪器通常由光源、单色器、样品池、狭缝、光电倍增管（PMT）等部件组成。常用的光源是高压汞灯和氙弧灯。大多数荧光分光光度计采用光栅作为单色器，它具有较高的灵敏度、较宽的波长范围，能扫描光谱。样品池通常是石英方形池，四面都透光。 图7-3 荧光分析基本装置方框图 荧光分光光度计多采用光电倍增管（PMT）为检测器。读出装置包括记录仪、阴极示波器和显示器等。 荧光物质的量子产率和摩尔吸收系数k的乘积表示的灵敏度称为仪器的绝对灵敏度，用b表示。 b = k b值越大，方法的灵敏度越高。 目前，仪器的灵敏度趋向于用纯水的拉曼峰信噪比（S/N）表示。 6. 化学发光分析法的基本理论 一个反应要成为化学发光反应，必须满足如下基本要求： （1）化学反应必须提供足够的化学能，且被发光物质吸收形成电子激发态。 （2）吸收化学能处于电子激发态的分子返回到基态时，能以光的形式释放出能量，或把能