第二章细菌感染实验诊断29.pptVIP

3．β-半乳糖苷酶试验 (1)原理：有的细菌可产生β ·半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚· β -D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。 * (2)试剂：O．75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中，在加入缓冲液(6．9g NaH 2PO4溶于45ml蒸馏水中，用30％NaOH调控pH为7.0，再加水至50ml)5ml，置4℃冰箱中保存。 * （3）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37 ℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min~3小时观察结果。 * (4)结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。 (5)应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。 * 4．七叶苷水解试验 (1)原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸的二价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。 (2)培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。 * (3)方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。 (4)结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 (5)应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。 * 5．甲基红试验 (1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解，产生甲酸等，使pH降至4．5以下，加入甲基红试剂则呈红色为阳性。若分解葡萄糖产酸量少，则pH 6．2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。 * (2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 (3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2-4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 (4)结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。 * (5)应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属则为阴性。 * 6．V-P试验 (1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，脱羧产生乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧氧化为二乙酰，进而与胍基起作用生成红色化合物，则为V-P试验阳性。 (2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 * (3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35 ℃培养48h后加入甲液(6％n·萘酚酒精溶液)和乙液(40％KOH溶液)，振摇。 (4)结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35 ℃ 4h后仍如故者即为阴性。 (5)应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。 * A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-wt!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-wt!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)wt!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)ws!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)vs!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI7F3C0y)vs#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-wt!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)wt!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)ws!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)vs!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZkShPdMaJ7F4C0z)ws!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)vs!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0z)vs#pXmUi