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斑点叉尾鮰病毒(CCV)结构蛋白鉴定 　　摘要：采用蔗糖密度梯度离心法分离纯化斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus， CCV），利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱（ESI-Q-TOF MS/MS）对得到的样品进行分析。结果共鉴定了13种结构蛋白，包含1种未报道过的结构蛋白ORF22。实验结果为进一步研究CCV结构蛋白的功能及蛋白质组学提供了参考。 　　关键词：斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus，CCV）；结构蛋白；蔗糖密度梯度离心；质谱 　　中图分类号：S941.41+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4841-05 　　Identification of Structural Proteins of Channel Catfish Virus （CCV） 　　BI Peng，WU Zhi-xin，SU Nian，LI Li-juan 　　（College of Fisheries， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China） 　　Abstract： Channel catfish virus （CCV） in channel catfish ovary cells were purified through sucrose density gradient centrifugation， and then analyzed using the ESI-Q-TOF mass spectrometry technique. Totally， 13 structural proteins were identified， including a novel structural protein ORF22. This study provided a good reference to further study the function of structural proteins and proteomics of the CCV. 　　Key words： channel catfish virus（CCV）； structural proteins； sucrose density gradient centrifugation； mass spectrometry 　　随着我国斑点叉尾鯝养殖业的不断发展，其病害也日趋严重，已成为制约鯝鱼养殖业发展的主要因素[1]。斑点叉尾鯝病毒病（Channel catfish virus disease， CCVD）具有传染快、死亡率高等特点，其病原为斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus， CCV），主要感染鱼苗和鱼种。该病的病程比较短，一般为3～7 d，当饲养水温在25～30 ℃时疾病呈流行高峰，死亡率可达到90%以上[2]。CCV的传播方式主要有两种，即通过与疫水和患病鱼体接触进行水平传播以及经受精卵垂直传播[3]。1968年Fijan首次对CCV进行分离，随后Wolf和Darlington[4]根据其形态学特征鉴定为疱疹病毒。尽管CCV在结构上和人类单纯疱疹病毒1型（HSV-1）相似，但是两者核苷酸和氨基酸序列差异较大，亲缘关系较远[5]。2009年，国际病毒分类委员会（ICTV）将CCV从α-疱疹病毒亚科中分离出来，并且将其分类地位划分为鱼类疱疹病毒科（Alloherpesviridae）鯝鱼疱疹病毒属（Ictalurid herpesvirus）[6]。CCV是一种双链DNA病毒，病毒粒子大小约为175～200 nm，由囊膜、间层和核衣壳组成。核衣壳呈二十面体结构，由162个直径约为100 nm的壳粒组成[7]。CCV的基因组大小约为134 kb，整个基因组预测由76个开放阅读框（Open reading frame，ORF）组成。 　　蛋白质是生理功能的执行者，是生命活动的体现者，对蛋白质的结构和功能的研究将直接阐明机体在生理或病理条件下的变化机制[8]。目前，国内已有较多关于CCV研究的相关报道，以CCVD的防治对策研究为主。同时，也有部分CCV检测方法的研究，如李惠芳等[9]建立了TaqMan实时荧光PCR检测方法，杜玉东等[10]对CCV核酸探针检测方法进行了研究。除此之外，相关CCV多克隆抗体的制备[11]以及CCV“自杀性”DNA疫苗的构建[12]等研究也得到开展。尽管如此，国内对CCV结构蛋白的相关研究相当匮乏。Davison等[5]早在1995年就对纯化的CCV病毒粒子进行了SDS分析，并利用基质辅助激光解吸电离（MALDI）质谱法鉴定了11种结构蛋白。随后，Kunec等[13]利用高效液相色谱