實驗2 光學顯微鏡的使用及微生物的觀察实验使用镜的实验2实实验使用镜的实验2实课件.ppt

實驗2　光學顯微鏡的使用及微生物的觀察 目的 原理 材料與儀器 步驟與方法 實驗注意事項 實驗結果 目的 藉由了解光學顯微鏡的構造及使用方法，同時並教導讀者能夠正確的使用顯微鏡來觀察微生物的外型及大小，以便後續微生物實驗的應用。 原理 光學顯微鏡主要是利用光學的原理將物品放大，使得物品得以讓人們可以透過肉眼觀察到。光學顯微鏡是由載物台、物鏡、目鏡、調節輪及照明設備等構成基本結構，利用目鏡及物鏡此兩種光學透鏡將微小物體放大到足以利用肉眼觀察的尺寸，再藉由調節輪系統調整載物台的上升或下降並搭配照明設備來使觀察的物體影像清晰的呈現於視野中，由於其構造簡單及使用便利，故常被用來當作微生物觀察之第一步驟。 材料與儀器 菌種 設備儀器及其他用具 菌種 金黃色葡萄球菌 枯草芽孢桿菌 青黴菌 啤酒酵母菌 設備儀器及其他用具 光學顯微鏡 載玻片 蓋玻片 接種環 拭鏡紙 無菌水 碘液 步驟與方法 光學顯微鏡的構造與介紹 光學顯微鏡的操作 微生物的觀察 光學顯微鏡的構造與介紹 鏡座 載物台 粗調節輪 細調節輪 光源 接物鏡 接目鏡 鏡座 鏡座是顯微鏡的基本骨架，它由底座和鏡臂兩部分組成。上面連接有鏡台，是用來安裝光學放大系統元件的基礎。 載物台 載物台中央有一個小孔洞，為下方光線通過之路徑。鏡台上裝有樣本夾及調整器，其作用為固定或移動樣本的位置，使得觀察之對象可位於視野中心，以利找出最適之觀察位置。 粗調節輪 粗調節輪是調整物鏡和樣本間距離的裝置。當顯微鏡之粗調節輪螺旋向前轉動，鏡頭則下降接近樣本或以右手向前轉動調節輪使鏡台上升，讓樣本接近物鏡；反之則下降，使樣本與物鏡之距離拉遠。 細調節輪 使用粗調節輪只能夠粗略的調節焦距，若要得到最清晰的物象，則應使用細調節輪來做進一步的調整。細調節輪每轉動一圈可使鏡筒移動01毫米（100微米），以取得樣品較佳之焦距。 光源 較早的光學顯微鏡是利用自然光源來檢視物體，通常在鏡座上裝有反光鏡用來照明樣本。目前的光學顯微鏡鏡座上大都裝有光源，並設有電流調節鈕，以調節通過電流大小來調整光照的強度。 接物鏡 安裝在鏡筒前端上的接物鏡是利用光線原理使檢測樣品第一次形成影像。接物鏡放大樣品的倍數是取決於接物鏡的孔徑數值，而孔徑數值都標在每個物鏡的外部，其孔徑數值越大鏡頭長度愈長，接物鏡放大檢驗樣品的倍數越大，通常物鏡放大倍數為5~100倍。 接目鏡 接目鏡的作用是把接物鏡放大的影像再進行一次的放大，並把影像映入觀察者的眼中。接目鏡的結構較簡單，普通光學顯微鏡的目鏡通常是由兩片凸透鏡組成，凸透鏡之間或在兩個凸透鏡的下方，裝有由金屬製成的環狀光闌，當物鏡放大後的中間像就落在環狀光闌平面處，所以可在其上安置目鏡比例尺。 一般目鏡放大倍數約為5~10倍，目鏡焦距長度愈短，放大倍數則愈高。 光學顯微鏡的操作 光學顯微鏡之放大原理是由接目鏡及接物鏡的倍數所決定，一般光學顯微鏡可有數組的物鏡及目鏡可進行搭配，其放大倍數的計算如下： 顯微鏡的放大倍數＝ 接目鏡的放大倍數 × 接物鏡的放大倍數 將顯微鏡自保存櫃或鏡箱內拿出時，應以右手緊握鏡臂，左手拖住鏡座，平穩並小心地將顯微鏡搬運到實驗桌上。 先確認電源開關是否位於off狀態，然後接通電源，打開主開關，調整顯微鏡光源亮度，使其亮度適中。 將標本置於鏡台上並將其以樣本夾固定好，先以低倍數物鏡觀察，再先後調整粗調節輪及細調節輪進行對焦，找出含有菌體之區域。 依次轉換成中、高倍數物鏡，並同時調整細調節輪進行對焦，仔細觀察微生物型態，此時接目鏡若有比例尺裝置，即可測量菌體之大小。 油鏡的使用:在高倍數物鏡找到清晰的菌體影像後，可在玻片標本中央滴一滴油鏡油，並將接物鏡切換至油鏡。先緩慢移動鏡台高度使油接觸油鏡鏡頭，此時可以細調節輪調整標本焦距，直至看清菌體物像為止，而利用油鏡進行觀察時應可看到菌體清楚之外觀輪廓。 在菌體觀察完畢後，應將鏡台降下，取出玻片標本，將光源調整鈕旋至關閉，並切斷電源，放入顯微鏡保存箱中保存。 微生物的觀察 細菌菌落 真菌 酵母菌 細菌菌落 先以肉眼觀察微生物菌落的大小，並詳細記錄菌體表面粗糙與否；邊緣之緻密程度、透明程度及厚度等特徵。 將含有細菌之菌液以無菌接種環少量且均勻的塗抹於載玻片上，先以低倍數光學顯微鏡觀察，再逐步轉換成高倍數，最終至油鏡，詳細觀察菌體之外觀，並將其予以記錄及繪圖。 真菌 在載玻片上以無菌接種環以無菌操作方式挑取少許黴菌菌絲在碘液中均勻展開，接著蓋上蓋玻片。 以低倍鏡觀察菌絲結構。 繪出青黴菌型態圖。 酵母菌 在載玻片上滴加一滴碘液，利用無菌接種環以無菌操作方式挑取少許啤酒酵母菌，於碘液中充分混勻，接著蓋上蓋玻片。 先以低倍鏡觀察，爾後再換用高倍鏡觀察細胞型態。 繪出啤酒酵母菌型態特徵圖。 實驗注意事項 使用光學顯微鏡觀察微生物時，應注意樣本放置