一步样品处理气相色谱法测定饼干脂肪酸及其在实验教学中应用.doc

一步样品处理气相色谱法测定饼干脂肪酸及其在实验教学中应用 　　摘要：本文介绍了一步样品处理气相色谱测定饼干中脂肪酸的新方法，并将其成功应用于实验教学。样品、乙酰氯-甲醇溶液和正己烷（含内标），密封于反应管中80℃水浴条件下反应提取2h，加入碳酸钾溶液中和，静置分层；上清液经毛细管色谱柱，氮气作载气，等压模式色谱分离，火焰离子化检测器进行检测。通过对5个实际样品的测定表明，十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸是饼干样品脂肪酸组成的主体，其中2个样品有反式油酸检出；将本法用于食品仪器分析实验教学具有专业特色鲜明、知识点多、操作简单、实验耗时适中和实验成本低等特点。 　　关键词：饼干；脂肪酸；气相色谱法；实验教学 　　中图分类号：G642.4 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2013）35-0231-03 　　仪器分析是食品科学学科的一门重要基础课，而其中实验教学是一个重要环节。但是，随着科技的进步，大型分析仪器的信息化和自动化程度不断提高，实验中要求学生动手的份额却随之下降，给如何合理地设计实验、安排实验，如何精选实验内容提出了新的挑战。本文以气相色谱法的实验教学为例，结合教学专业和人们对食品质量、营养与健康的关注，以饼干脂肪酸的测定为实验内容，通过改进样品处理，建立了一个实用的脂肪酸检测方法，同时将其合理地应用于实验教学，并对教学效果进行了讨论。 　　一、材料与方法 　　1.材料与试剂。各种饼干样品购自本地超市；分析纯甲醇、甲苯、乙酰氯和碳酸钾（北京化学试剂公司）；正十九碳脂肪酸甲酯、C4-C24三十七种脂肪酸甲酯标准品（Sigma公司）。 　　2.仪器与设备。Agilent7890A气相色谱仪，配火焰离子化检测器和7693自动进样器（美国，安捷伦公司）；恒温水浴锅（常州翔天实验仪器厂）；2.0×15cm带胶塞和螺口盖玻璃水解管。 　　3.溶液配制。乙酰氯-甲醇溶液（1+10，v/v）：将10mL乙酰氯甲醇在不断搅拌的条件下缓慢滴入100mL甲醇中，室温贮存于带磨口盖的广口瓶中。内标溶液（1.0mg·mL-1）：准确称取正十九碳脂肪酸甲酯0.5g，用少量正己烷溶解，并转移定容至500.0mL容量瓶中，于贮??瓶中冷冻保存，使用时放置到室温取用。碳酸钾溶液（60g·L-1）：6g碳酸钾溶于水，定容至100.0mL容量瓶中。 　　4.样品处理。将饼干样品于研钵中研碎，混匀，然后准确称取0.2000-0.4000g于2.0×15cm水解管中，准确加入5.00mL内标溶液和4.00mL乙酰氯-甲醇溶液，充氮气后，塞紧橡皮塞，拧紧螺口盖，于80℃水浴反应2h。取出冷却，加入5.0mL碳酸钾溶液，漩涡震荡使充分混合，静止，待分层后（如分层较慢可离心处理）取上清于进样小瓶中进行气相色谱分析。 　　5.分析条件。使用JWDB-23（60m×0.25mm×0.25μm）色谱柱，载气为氮气，程温恒压模式进行分离。柱头压力为33.3psi；进样口温度250℃，分流进样，分流比为30：1；升温程序为：60℃保持1min，20℃/min至150℃保持10min，5℃/min至190℃保持25min，20℃/min至200℃保持20min，10℃/min至220℃保持5min。检测器温度300℃，空气流速400mL/min，氢气流速30mL/min，尾吹气25mL/min。 　　6.结果计算。公式①：wi=Ai×Fi×（mC19：0/AC19：0）/m。公式②：Xi=Ai×Fi×（mC19：0/AC19：0）/∑（Ai×Fi×mC19：0/AC19：0）×100%。式中：wi为各脂肪酸含量（近似用脂肪酸甲酯含量表示），mg·g-1；Ai为各脂肪酸的色谱峰面积；Fi为各脂肪酸的理论相对校正因子；mC19：0为内标质量，g；AC19：0为内标色谱峰峰面积；m为样品质量，g；Xi为各脂肪酸百分组成。 　　二、结果与讨论 　　1.对样品处理方法的改进。食品中脂肪酸的测定一般需经过提脂、皂化和甲酯化等过程[1]，实验用时长，不能满足教学实验的要求。一步提取法是指在样品反应管中同时加入甲酯化试剂和提取剂，反应后生成的脂肪酸甲酯既被有效提取到有机试剂中，操作较为方便。关于一步法的可靠性已有充分的论证[2-4]且被新国标方法[5]所采纳。本实验不同之处在于提取溶剂中定量加入了内标物。由于处理过程等同采用国标方法[5]，保证了实验结果的可靠性；又因内标的使用从而提高了定量分析的准确性。 　　2.色谱分离与定量分析。脂肪酸（甲酯）的色谱分离，常用固定相有键合聚乙二醇和键合氢氰丙基芳基聚硅氧烷，毛细管柱长根据脂肪酸组成情况可选择30m、60m或100m。本实验使用60m长的键合氢氰丙基芳基聚硅氧烷毛细管柱，通过优化升温程序