出血性疾病的实验室检测2011课件.ppt

出血性疾病的实验室诊断 瑞金医院 止血过程 凝血因子缺陷症检测 凝血途径 血友病筛选及诊断试验 PT APTT TT Fg 混合试验(mixing test) PT延长＞3′， APTT延长＞5′ 患者血浆：正常人血浆 1：1或4：1 即刻检测，37°C孵育2h后检测 结果判断： ＞X+2SD 不纠正 Mixing test 结果判断 因子缺陷 APTT参考范围 26-34s APTT 60s APTT1:1mix 32s APTT被纠正 因子缺陷 Mixing test 结果解释 aPTT results Example 1 2 3 A -- normal plasma 30” 30” 30” B -- test plasma 90” 90” 90” C -- test+normal (incubated) 35” 70” 70” D -- test+normal (non-incubated) 35” 48” 70” Example 1 – 因子缺乏 Example 2 – FVIII抑制物 Example 3 – 即刻反应抑制物 Mixing test 应用 初步判断： 凝血因子缺陷 FVIII抑制物存在 狼疮抗凝物质存在 一步法检测FVIII:C (One-Stage) 原理： 基于 APTT凝固法 乏FVIII血浆倍比稀释参比血浆和待检血浆 APTT时间与FVIII:C对数成线性关系 制备标准曲线 FVIII:C检测 One-stage Factor VIII Assay 试剂因素： 磷脂 激活剂 乏FVIII血浆 血友病A血浆 免疫吸附制备 VWF含量正常 发色底物测定原理 发色底物法测定F VIII:C 商品化试剂盒 两步法的原理 SSC ISTH推荐为高纯度FVIII:C测定参比方法 凝固法和发色底物法 抑制物检测方法 Bethesda法 Nijmegen modification 狼疮抗凝物质检测 相关概念 临床疑似APS APTT延长 混合试验证实有抑制物存在 排除肝素导致的APTT延长 TT RT 检测方法 ELISA法检测： 抗心磷脂抗体 抗磷脂抗体 β2GPI 抗凝血酶原抗体 功能测定-凝固为基础的检测 用狼疮抗凝物质检测β2GPI-磷脂和/或凝血酶原-磷脂复合物 基于PT、APTT、dRVVT 的测定 血管性血友病（VWD） VWD 血管性血友病因子（VWF）数量或者结构异常引起 3个型（1型、2型、3型） 2型分为2A、2B、2M、2N四个亚型 VWD诊断 FVIII:C VWF:Ag VWF:RCo BT PFA-100? VWF多聚体检测 胶原结合试验 FVIII结合试验 多聚体电泳 FVIII结合试验 血小板功能异常性疾病 血小板功能检测 血小板计数 血涂片检查 血块收缩实验（血小板与Fb的相互作用） 血小板功能检测 血小板聚集试验---原理 常用诱导剂诱导的血小板聚集 ADP 胶原 肾上腺素 瑞斯托霉素 花生四烯酸 正常人不同诱导剂诱导的血小板聚集和释放反应 不同诱导剂诱导的血小板聚集和释放反应-----服用阿司匹林后 流式细胞仪的应用 Bernard–Soulier syndrome GPIb-, GPIX-, and GPV-特异单克隆抗体 Glanzmann thrombasthenia αIIb- 和 β3-特异性单克隆抗体 Storage pool disease 5-羟色胺特异的单克隆抗体 血小板无力症流式检测结果 电镜检查 应用不同的电镜技术 可以分析血小板胞浆内的内容物和颗粒 有助于血小板贮存池病和血小板释放障碍的诊断 出血性疾病的检测 凝血因子缺陷症检测 抗凝物质增多检测 凝血因子抑制物检测 VWD检测 血小板功能缺陷检测 To : Meyer, Fressinaud et al. Sensitivity in vWD Type 1 Comparison of Bleeding Time (BT) and Closure Time (CT) in Type 1 vWD BT (min) 20 5 10 15 0 Epinephrine ADP CT (s) 250 200 150 100 50 PFA-100? Clinical Application Sensitivity for vWD - Overview BT Col/Epi Col/ADP Type 1 53% 94% 100%(n=36) Type 2 (no 2N) 85% 100% 100%(n=13)