体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用医学课件.ppt

实验7.9体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用 【目的】 1. 通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用。 2. 通过将戊巴比妥钠分别与损伤肝脏或正常肝脏体外孵育不同时间，进一步分析肝药酶活性和孵育时间长短对药效的影响。 【原理】 肝组织内含有细胞色素P450混合功能氧化酶，致戊巴比妥钠代谢失活，影响其催眠作用。 【器材与药品】 剪刀、手术剪、无齿小镊、培养皿、10ml试管、10ml离心管、试管架、恒温水浴箱、离心机、天平秤、10ml移液管、0.25ml注射器、玻璃搅棒、95％氧气和5％二氧化碳混合气体、0.4％戊巴比妥钠溶液、硫代乙酰胺（TAA）。 【实验动物】 小白鼠、体重18－22g。 【实验步骤】 1．取离心管及试管各5支，分别标记为A、B、C、D、E管。 2．颈椎脱臼法处死小鼠，用镊子小心分离出肝脏，置于生理盐水中，用滤纸吸干水份，去除胆囊，然后将肝脏置于培养皿中，分别称取1g置于A、B离心管口剪碎。同法取TAA损伤肝脏小鼠，各取1g置于C、D离心管口剪碎。 【注意事项】 1．肝组织分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性。 2．肝切片孵育过程中应经常用玻璃棒搅动离心管中的内容物，以使肝切片与药物充分发挥作用。 3．通气时肝培养液内气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面。 【讨论】 1.戊巴比妥钠经肝、肾、损坏肝组织孵育后，分别对小鼠的睡眠发生什么影响？为什么？ 2.药物在肝脏中的转化有哪些类型？戊巴比妥属何种类型？ 3.戊巴比妥在肝内的代谢，对药物的相互作用有何影响？ * * 3． A、 B、 C、 D、 E各管准确加入 0.4％戊巴比妥钠生理盐水溶液5ml（每克肝组织加入5ml），同时置于37℃恒温水浴中孵育。 A、C各 30分钟， B、D、E各 1小时，培养期间每 10分钟通入气体一次。 4．将上述孵育液离心（3000rpm，5分钟），然后转移上清液于相应的A、B、C、D、E试管内。 5．取小鼠10只，称重后均分为A、B、C、D、E五组，按0.1ml/10g剂量分别腹腔注射相应A、B、C、D、E试管内的溶液。 管号 处理 潜伏期（min） 持续时间（min） A 正常肝/30min B 正常肝/60min C 损伤肝/30min D 损伤肝/60min E 未处理/60min 体外孵育肝切片对戊巴比妥钠作用的影响 4+%XRLGAuojd71(#UOJDxrlga4-%XRLGAuoidsyDJPV#(28djpvBGMSY%+5bgmsyEJPV!(28ejpvBGMSY+5bhmsyEJPV!(28ekpvBHMSY+5bhmsyEKPV!)28ekpvBHNSY05bhnsyEKPV!)38ekqvBHNSY05bhntyEKQV!)38ekqvBHNTY06bhntyEKQV!)39ekqwBHNTY06chntzEKQW!)39ekqwCHNTZ06chntzEKQW$)39fkqwCHNTZ06cintzFKQW$)39fkqwCINTZ*06cintzFLQW$-39flqwCINTZ*16ciotzFLQW$-39flrwCIOTZ*16ciotzFLRW$-49flrwCIOUZ*17ciouzFLRW$-4aflrxCIOUZ*17ciouAFLRX$-4aflrxCIOU#*17diouAFLRX$-4aglrxDIOU#*17djouAGLRX%-4aglrxDJOU#(17djouAGLRX%+4agmrxDJOU#(17djpuAGMRX%+4agmsxDJPU#(27djpuAGMSX%+5agmsxDJPU#(28djpvAGMSX%+5agmsyDJPV#(28dmsyEJPV!)28ekpvBHMSY+5bhnsyEKPV!)28ekqvBHNSY05bhnsyEKQV!)38ekqvBHNSY06bhntyEKQV!)38ekqwBHNTY06bhntyEKQW!)39ekqwBHNTZ06chntzEKQW!)39fkqwCHNTZ06chntzFKQW$)39fkqwCHNTZ*06cintzFKQW$)39flqwCINTZ*06ciotzFLQW$-39flqwCIOTZ*16ciotzFLQW$-49flrwCIOTZ*16ciouzFLRW$-49flrxCIOUZ*17ciouzFLRX$-4aflrxCIOUZ*17diouAFLRX$-4aflrxDIOU#*17diouAFLRX%-4aglrxDIOU#(17djouAGLRX%-4agmrxDJOU#(17djouAGMRX%+4