粗毛栓菌漆酶cDN的PCR扩增 论文正文.docVIP

学院 本科生毕业设计（论文） 题　　目 粗毛栓菌漆酶cDNA的PCR扩增 姓　　名 学号 系 别 生命科学系 专　　业 生物工程 指导教师 职称 教授 2010 年 月 日 学院教务处制 摘要： 本实验以半纤维素作碳源培养粗毛栓菌9-12d，收集菌丝体，提取总RNA，做RT-PCR，扩增出两条漆酶cDNA片段。 关键词: 粗毛栓菌，漆酶cDNA，RT-PCR扩增 Abstract：Total RNA was extracted from Trametes gallica Fr. cailtiated for 12 days in hemicellulose medium. RT-PCR was carried out at tow cDNA fragments were amplified. Key words: Trametes gallica Fr., laccase cDNA, RT-PCR 指导教师评语： 该生认真查阅参考文献，实验方案设计合理，在规定时间内完成了预定任务，初步掌握了从事有关研究的基本实验技能，具备了一定的独立从事科学研究的能力，达到了本科生的培养目标。该文达到了学士学位论文水平。 指导教师签名： 年 月 日 论文等级： 系负责人（签章）： 年 月 日 系审核意见： 系公章： 年 月 日 填写说明 用蓝色或黑色墨水的钢笔（或签字笔）填写，书写要清晰、工整、规范，不得打印。 此表一式两份。一份装入学生档案；一份按此表、开题报告、中期检查表、成绩评定表、论文正文的顺序装订成册，留系存档。 目 录 引言 2 1实验材料与方法 2 1.1菌株及培养方式 2 1.2 使用试剂和仪器 3 1.2.1 使用仪器 1.2.1 所用试剂 1.3 准备实验 3 1.4 总RNA的提取 4 1.5 总RNA纯度与浓度的检测 4 1.5.1 RNA纯度测定 4 1.5.2 RNA浓度测定 4 1.6 总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 4 1.7 5 1.71 引物的设计………………………………………………………………5 1.72 RT-PCR反应 6 1.8 DNA电泳 5 2 结果与分析 6 2.1 总RNA提取后的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果 6 2 .2 RNA浓度及纯度检测 7 2.3 逆转录及PCR反应 7 2.4 DNA核酸电泳 7 3 讨论 7 参考文献 致谢 PCR Amplification of Laccase cDNA in Trametesec gallica Abstract Total RNA was extracted from Trametes gallica . RT-PCR was carried out for amplification of Laccase cDNA and laccase was amplified. Key words Trametes gallica, Laccase cDNA, RT-PCR 引言 漆酶（Laccase，Lac）是一种多酚氧化酶, 在结构和功能上与植物抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆铜蓝蛋白存在着许多相似之处[2]。它是最简单的多铜氧化酶, 一般含有4个铜原子, 分布于3个高度保守的不同结合位点, 每个铜原子在催化机制中都有很重要的作用。漆酶能催化 O2通过4个电子还原成水, 并且伴随着一些酚类底物的氧化[3]。它最早是从漆树的分泌物中发现的, 随后人们发现一些高等真菌也能分泌这种酶。现在人们知道, 漆酶广泛存在于担子菌、半知菌和子囊菌中, 但其中最主要的生产者是担子菌中的白腐菌[4]，粗毛栓菌（Trametes gallica）是一种白腐担子菌，在我国分布广泛，是杨木的一种主要生物降解者。已有研究表明，该菌产漆酶能力较高[5]。 漆酶早期的研究主要集中在体内功能的研究，随着20世纪70年代前后聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子克隆等生物学技术的问世, 漆酶的研究也揭开了新的一页。在国外很多菌种的漆酶基因得到了克隆并且进行了分析和鉴定, 一些漆酶基因也实现了其异源表达[6]。漆酶在木质素降解、微生物菌体形态形