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学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP↗↗ Exercise seven 土壤微生物的分离纯化 微生物的分离、培养和菌种保藏 目的要求 实验材料 试验程序 思考题 目的要求 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作计数。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。 实验材料 样品：新鲜土壤。 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 淀粉琼脂培养基 马铃薯蔗糖培养基 无菌水：带有玻璃珠装有99mL无菌水三角瓶 装有9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、 接种环、酒精灯、火柴、标签纸。 试剂：5000U/mL链霉素液 0.5％重铬酸钾液 实 验 总 流 程 实验程序Ⅰ—— 倒平板的方法 将培养基加热融化，待冷却至55－60 0C时，倒平板。 实验程序Ⅱ——制备土壤稀释液 制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤1g，放入99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－2的土壤悬液。 2. 另取装有无菌试管5支，用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6 、10－7 。在每只试管中用无菌吸管加入4.5ml无菌水。 3.取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 →10 － 5 → 10－6土壤稀释液。 实验程序Ⅲ ——稀释平板法（混合法） 涂平板：每人取培养皿1付，即每个同学做一只。 1.先在无菌培养皿底部贴上标签，注明（分离菌名）、稀释度、组别、班级。 2.另取一吸管，以无菌操作法吸取相应的土壤稀释液0.1mL，加在无菌培养皿里。 3.取已熔化的在水浴锅中保温500C左右的马铃薯培养基（PDA培养基），分别倒约15－20ml入上述培养皿中，轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28～300C恒温培养5～6d。观察真菌菌落形态以及计数 菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。 （见图7－4） 实验程序 Ⅳ——平板涂抹法（涂布法） 每人取无菌培养皿1付（每个同学做一只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 取已熔化的高氏培养基，分别倒15－20ml入培养皿中，铺平，制成平板。 凝固后，另取一支吸管吸取相应的土壤稀释液0.2mL放在平板上。 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28～300C条件下培养3～4d，观察放线菌菌落形态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量（方法同上）。如果样品稀释适当的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 挑取单个菌落，接种于相应的斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，至最后得到纯培养为止。 实验程序Ⅴ ——平板划线法 每人取无菌培养皿1付，在皿底贴上标签，注明事项。 取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 凝固后，用接种环取相应的 菌液一环（10－2或10－3）在平板上划线（教师作示范）。 实验程序Ⅵ——四大类微生物菌落形态的比较和识别 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体