纳米技术在叶酸受体介导的结肠癌细胞靶向检测与治疗中的应用.docVIP

纳米技术在叶酸受体介导的结肠癌细胞靶向治疗中的应用 陈杨摘要：目的：利用结肠癌细胞表面叶酸受体的过量表达实现对结肠癌细胞的靶向性检测和治疗。方法：通过叶酸和人血清白蛋白偶联，再连接CdTe量子点，实现对结肠癌细胞的靶向性检测。通过叶酸修饰壳聚糖纳米微球，负载药物实现对结肠癌细胞的靶向性治疗。结果：由于未进行任何实验，本文是利用文献中曾经报道过的实验结果作为依据，进行尽可能合理的设想和推论。 关键词：叶酸受体 结肠癌 壳聚糖 一 理论依据 结肠癌是胃肠道常见肿瘤。传统的对肿瘤的检测和定位，由于缺乏实现靶向定位的方式，很难达到预期的检测效果。在进行放疗和常规化疗时，由于缺乏区分正常细胞和恶性肿瘤细胞的选择性，难以在病灶处聚集，传统的抗肿瘤药物容易引起全身的毒副作用、降低患者对治疗的耐受性。肿瘤靶向治疗有望将造影剂和抗肿瘤药物选择性地集中在肿瘤组织，而没有临床上区域动脉灌注所带来的手术痛苦和风险，因而是较好的替代方法。目前，肿瘤靶向治疗最大的障碍是缺乏合适的具有特殊识别能力的药物载体。寻找选择性强、能够有效载带抗肿瘤药物的靶向载体，是当前结肠癌靶向治疗中的热点问题。 靶向递药系统将化疗药物直接靶向肿瘤组织，提高抗肿瘤药物的疗效，提高药物在肿瘤组织中聚集的同时避免其在非靶向部位的聚集。肿瘤靶向递药系统可分为被动靶向和主动靶向两大类，前者主要借助于纳米尺度的递药载体实现，后者则建立在纳米递药系统的基础上通过肿瘤细胞膜表而的特异性受体介导。在结肠癌的治疗中，主动靶向的纳米递药系统是本文研究的重点。 叶酸是一种小分子维生素，结构如图1所示。它可被还原为四氢叶酸，后者是一碳单位转移酶的辅酶，参与一碳单位代谢和嘌呤、胸腺嘧啶的从头合成。与其他靶向分子如单克隆抗体相比，叶酸相对分子质量小、无免疫原性、价廉易得、稳定性好、与药物或载体之间的化学键合简单易行。因此以叶酸为靶向分子构建递药系统已成为主动靶向治疗肿瘤的一个重要研究方向。 图1 叶酸结构式 叶酸是人体必需的维生素，但人体不能合成叶酸，需要摄取外源性叶酸。其摄取途径是叶酸通过与细胞表面的叶酸受体结合，内吞进入细胞。由此可以推测，在例如结肠癌细胞这类增殖较多、分裂较快的细胞，需要大量的叶酸。 叶酸受体是一种糖基化磷脂酰肌醇连接的膜糖蛋白，相对分子质量为38~40ku，主要有3种形式：α，β，γ/γ’。还原型叶酸辅酶以相反的立体异构体分别与和α型和β型结合。α，β和γ型的氨基酸序列信号肽分别包含25，19和23个氨基酸残基。α型有3个潜在N-糖基化位点：-Asn 69，Asn 161，Ash 201。而β型有2个糖基化位点位于Asn 99、Asn 179。已证实，在人类基因组中还存在基因编码的第4种受体亚型，但目前，无论是成人还是胚胎组织，都无法检测到，这可能是一种临时的表达形式、结合变异体或一种假叶酸受体基因。 近年来，对叶酸受体在药物靶向输送、癌症及风湿性关节炎的免疫疗法等作用引起广泛关注。与其他可利用的肿瘤标记物相比，叶酸受体优势明显。其配体叶酸易通过γ～羧基与其他分子结合，不会导致其亲和力降低。并且通过叶酸受体介导的内吞作用，能有效将结合FR的叶酸、叶酸偶联物摄入细胞。此外，叶酸受体在正常组织中的表达高度保守，只在肺、肾、脉络膜、胎盘中有低到中等水平表达，且以β亚型为主。但是在大部分恶性肿瘤中，如卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌和鼻咽癌中均高度表达，有时可比正常组织高出100～300倍。有文献报道卵巢癌、子宫内膜癌、睾九绒毛膜癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌等来源于上皮组织的癌组织中α亚型受体高度表达，比正常组织高出100～300倍，β亚型受体表达也增加，但α亚型受体的增加50倍于β亚型受体。 叶酸受体对叶酸及其5-甲基四氢叶酸、5-甲酰基四氢叶酸、磺胺、甲氨嘌呤、5,10-亚甲基四氢叶酸等叶酸类似物具有很高的亲和力和特异性，可介导这些物质内吞进入细胞。其转运机制如图2所示，外源性的叶酸复合物与细胞膜表面的叶酸受体特异性结合，周围形成凹陷，进入细胞内形成内涵体。在核体内质子泵的作用下，内涵体内部的pH由7下降至5，使复合物构象改变，叶酸修饰的药物从复合物上解离，释放到细胞内，而叶酸受体可以再回到细胞膜表面，循环转运药物。因此，可以利用这种转运机制和叶酸受体在结肠癌细胞上的高度表达，对肿瘤的靶向性显像诊断和治疗方法进行设计。 图2 叶酸受体介导的内吞作用过程 二 载体设计 药物的低毒和高效对疾病的临床治疗十分重要。常用的抗癌药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也很有可能损害机体正常组织细胞，造成全细胞杀伤而非我所期望的特异性杀伤。之前我们提到的，肿瘤细胞表面高表达叶酸受体，而正常细胞表面很少过表达叶酸受体。且利用叶酸与叶酸受体的高度亲和性，抗肿瘤药物可经叶酸受体介异