层析分离技术二吸附层析.ppt

层析分离技术 马王堆中有木炭，可能用于吸湿和防腐? ... 冰箱中除臭，活性炭。 工业应用，产品分离、脱色。 吸附的特点： （1） 不用或少用有机溶剂 （2） 操作简便，安全 （3） 生产过程pH变化小 （4） 从稀溶液分离溶质 （5）?吸附剂对溶质的作用小 （6）?吸附平衡为非线性 （7） 选择性差 二、吸附过程理论基础 3、物理吸附力的本质 4、吸附等温线 1——Henry； 2——Freundlich； 3——Langmuir； 4——矩形 （1）Henry 型吸附平衡 在一定温度下，平衡时吸附剂吸附溶质浓度q*与液相溶质浓度c之间的关系为线性函数： m为分配系数。 适应条件：在低浓度范围之内成立。当浓度较高时，吸附平衡常呈非线性，上式无效。 （2）Freundlich 型吸附平衡 其经验公式为 其中，k和n为常数，n一般在1-10之间。 Freundlich等温线可描述大多数抗生素、类固醇、甾类激素等在溶液中的吸附过程。 （3）Langmuir型吸附平衡 Langmuir 单分子层吸附理论：吸附剂表面有许多活性点，每个活性点具有相同的能量，只能吸附一个分子，并且被吸附的分子间无相互作用。A为表面活性中心。 基于上述平衡，及假定单分子层吸附，得Langmuir 型吸附平衡方程 式中：qmax为吸附容量，kb为结合常数 当n个分子在一个活性中心发生吸附时，即存在 此时有： （4）矩形吸附平衡 流化床：当表观流速增大至最小流化速度，颗粒不再相互支撑，开始悬浮在液体中；进一步提高流速，床层随之膨胀，床层的压力降几乎不变，但床层中颗粒的运动加剧，这时的床层为流化床。 优缺点：压降小，可直接吸附含颗粒的料液；但存在较严重的返混，吸附剂的利用率低，分离效率下降。 膨胀床与固定床的区别： 膨胀床上的床层上部安装有可调节床层高度的调节器，当液体（料液或清洗液）从床底以高于吸附剂最小流化速率的流速输入时，吸附剂床层产生膨胀，高度调节器上升。 由于床层空隙率高，可使菌体细胞或细胞碎片自由通过。可直接处理菌体发酵液或细胞匀浆液，回收其中的目标产物，从而可节省离心或过滤等预处理过程。 可连续分离操作； 可根据生物、药物活性成分的种类调试不同的分离方法（层析、离交、吸附等等）； 制备效率高，提纯效果较一般工业制备色谱分离高出40%。 运行成本低，使加工成本降50%，甚至80%。? 氧化铝可能带有碱性（因其中可混有碳酸钠等成分），对于分离一些碱性中草药成分，如生物碱类的分离颇为理想。但是碱性氧化铝不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离。因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应，如异构化、氧化、消除反应等。 （ 3）氧化铝 活性氧化铝 氧化铝空心球 3、洗脱剂的选择 能较完全地洗脱所要分离的成分，并力求用量少、洗脱时间短。 纯度较高 稳定性好 能较完全地洗脱下被分离的成分 黏度小 易和所需的成分分开 选择洗脱剂的顺序应从极性小 大 一般，pro或核酸被极性强的HA吸附后，要用含有盐梯度的缓冲液洗脱；而甾体、色素等化合物被极性较弱的硅胶吸附后，则可用有机溶剂洗脱 4、层析操作 （1）层析柱 绝多数层析柱是下端为细口并带有筛板的玻管。 柱的直径与长度之比，一般为1：10～1：40。 采用极细颗粒吸附剂装柱时，宜用比例大的层析柱。反之，则宜用比例小的层析柱。这样有利于节省时间和提高分辨率。 （2）吸附剂的用量 根据其自身的操作容量和分离物中各成分的性质决定的。 当操作容量高时，吸附剂用量少。 一般吸附剂的用量为被分离样品的30--50倍。 若样品中各成分的性质相似难以分开时，则吸附剂用量应增大，有时大于100倍。 （3）装柱 干法装柱 直接加吸附剂至柱中，然后倒入溶剂 此法不易排尽气泡，容易导致层析不均匀 湿法装柱 先加适量溶剂至柱内，排走空气，然后将预先浸泡好的吸附剂搅均，随即将此混悬液倾入柱中（图3-5）；待其自然沉淀至柱高的1/4 ~ 1/3 时，打开下端出口，让溶剂慢慢流出，使柱子上端悬浮液徐徐下降至需要的高度；并用2~3倍量的洗脱剂流过层析柱，使其达到平衡 注：吸附剂表面要平整，应一直浸泡在溶剂液面以下，严防产生气泡。湿法装柱均匀，不易留有气泡 （4）上样 样品的溶解度好 加入的样品量利于提高分辨率 样品的浓度与粘度的考虑 注意：加样时避免冲动基质 为了获得满意的分离结果，洗脱液的流速务必恰当控制。