八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.PPTVIP

实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 2 掌握PH梯度法的原理及操作技术 1 熟练进行薄荷中的挥发油和青蒿中的青蒿素的提取分离操作； 能进行当归、丁香中挥发油的提取分离操作。 3 通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。 一、实验目的 能够运用回流 提取法对大黄 中总蒽醌类化 合物进行提取， 并能根据色谱 结果，设计液液 萃取法分离混合 物的实验方案。 4．学习蒽醌类化合物鉴定方法 二、实验原理 三、实验步骤 1．乙醇总提取物的制备 游离蒽醌的提取 取大黄粗粉50g，置于500ml圆底烧瓶中， 加95%乙醇以约高出生药面为度，置水浴加热回流2～3小 时，趁热抽滤。滤渣再以95%乙醇热提二次，趁热抽滤后 合并三次乙醇提取液。浓缩乙醇提取液，得到乙醇总提取物。 2．总游离蒽醌的提取，亲脂性成分与亲水性成分分离 将乙醇总提取物浸膏加水适量混悬，加乙醚150ml于500ml分 液漏斗中萃取，充分振荡后放置，倾出醚层，再加50ml乙醚振 摇，放置，倾出醚层，同法操作6次，直至乙醚液呈色较浅时为 止，合并乙醚液，乙醚溶液含总游离蒽醌。 3．蒽醌的分离 ①???? 大黄酸的分离 将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5% NaHCO3水溶液20ml，振摇。放置分层，放出下层NaHCO3溶 液，置于另一三角瓶中，上层乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加 5%NaHCO3溶液15ml萃取一次，每次振摇提取后，放置分层时 间应稍久，以免乙醚溶液混在下层水液中，影响分离效果。提取 过程中，如乙醚挥发，可酌量补加。合并NaHCO3提取液，注意 其呈色，在搅拌下小心滴加盐酸调pH2~3，观察酸化过程中的呈 色变化，析出物抽滤收集，干燥后称重。 ②???? 大黄素的分离 留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。 ④???? 大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离 留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收 集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4．鉴定 （1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加 1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色 （2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中， 加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色 （3）薄层检识 吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（8∶2）；苯-甲醇（8∶1） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察 （4）纸色谱检识 支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液 四、思考题 1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？ ③???? 芦荟大黄素的分离 留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液 每次15ml萃取3～4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取 2～3次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 （三） 蒽醌类化合物的提取与分离 蒽醌的提取与分离 提取方法 分离方法 碱溶酸沉法 蒽醌苷和游离蒽醌的分离 利用PH梯度萃取法分离 有机溶剂提取法 利用色谱法分离 游离蒽醌的分离 蒽醌苷的分离 蒽醌苷的分离 游离蒽醌的分离 提取方法 分离方法 有机溶剂 提取法 常用甲醇或乙醇提取，可将不同极性或类型的醌类成分都提取出 来，得到总醌类再进行分离。 碱溶酸沉法 适用于具有酚羟基的醌类化合物，由于其可溶于碱液，加酸后又沉 淀出。 游离蒽醌与蒽醌苷的分离 利用苷与苷元极性不同，溶解度不同的特点进行分离。 pH梯度 萃取法此法是分离游离蒽醌最常用的方法。是利用其酸性的差异进行分离的。 （三） 蒽醌类化合物的提取与分离 色谱法常用的吸附剂有硅胶和聚酰胺，慎用氧化铝，因羟