动物细胞融合与单克隆抗体制备ppt.ppt

杂种植株 筛选融合AB 的原生质体 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 方法？ 促进融合的方法？ 融合完成的 标志 植物细胞B 植物体细胞杂交技术过程 原理？ 原理？ * * 一、动物细胞融合 1、动物融合的过程 ①.细胞融合的概念 ②.诱导动物细胞融合的方法 ③.意义 * 2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程 * 思考题 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 酶解法，如纤维素酶或果胶酶 2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 无需，因为动物细胞无细胞壁 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 还可以利用灭活的病毒进行诱导 5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能 * 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 1、动物细胞融合过程 * 4、原理 细胞膜的流动性 5、最有价值的应用 制备单克隆抗体 3、过程 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 PEG等 杂交细胞 细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核 * 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 原生质体融合 植物组织培养 杂种细胞 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 常用方法 动物细胞A 动物细胞B * 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 * 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是 A．离心 B．灭活的病毒 C．电刺激 D．振动 2.动物细胞融合的目的中最重要的是 A．克服远源杂交不亲和 B．制备单克隆抗体 C．培育新物种 D．生产杂种细胞 * 7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体 请同学们阅读课本P52 * 提问 ？ 1.抗体是由何种细胞产生的？ ２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ ３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 二、单克隆抗体 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。 浆细胞 一种 * 抗体不纯 抗原 动物体 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 ４. 简述获得抗体的传统途径？ ５、这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 不能 怎样解决这个问题？ * 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂交细胞 二、单克隆抗体 * 为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 思考： 因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。 * B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 培养液中细胞有几种类型？ （只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 5种 B淋巴细胞、骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 3种 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。