第12篇-紫外-可见分光光度法-.ppt

1 * 第十二章 紫外-可见分光光度法 (UV-Vis) (Ultraviolet and visible spectrophotometry) §1. 概述 光就是一种电磁波，以巨大速度通过空间而不需要任何物质作传播媒介，也是一种量子流。 光具有波粒二象性： E = h? = hc/? 提供能量 能量与被测物相互作用 产生被检讯号 光学分析主要过程 ? ? ? ? ? ? ? 100nm 200nm 400nm 800nm 50μm 400μm 1m X射线 远紫外 近紫外 可见光 近红外 远红外 微波区 射频区 波长 §2. 基本概念 ?* ? ? ?* n 成键 反键 未成键 能量 价电子能级跃迁图 电子跃迁 类型 ? ? ? ?* ? ? ? ?* ? n ? ?* ? n ? ?* ? 电荷迁移跃迁 ? 配位场跃迁 ? A 吸收峰 吸收峰 谷 末端吸收 蓝移 红移 生色团 有? ? ?* 或 n ? ?* 跃迁的基团，如 C=C, C=O, ?N=N?, ?NO2 , ?C=S等 助色团 含有非键电子的杂原子饱和基团，如 ?OH, ?NH2 , ?OR, ?SH, ?SR, ?Cl, ?Br, ?I 等，当与生色团相连接时，使 其吸收峰向长波长方向移动，并使吸收 强度增加。 吸收带与分子结构 ? R带（ n ? ?* ）:含C=O, NO, NO2 ,N=N ? K带（ ? ? ?* ）:含C=C?C=C ? B带: 芳香族化合物特征吸收带 ? E带:芳香族化合物特征吸收 影响吸收带因素 ?位阻 ?跨环效应 ?溶剂效应 ?pH值影响 §3. 原理 公元初，罗马学者Pliny 发明分光光度法前身—比色法。五倍子浸液测Fe, 19世纪中叶，人们用氨水使铜、钴离子显色。 ? 1729年法国人 Bougouer 发表论文，一束光与玻璃片层数成 正比 ? 1760年德国人 Lambert, ? 1850年德国数学家 Beer, Lambert-Beer 定律 l I I0 摩尔吸光系数? 百分吸光系数 ?化学因素 ? 透光率测量误差 A: 0.2~0.7 最佳 ? 光学因素: ?非单色光 ?杂散光 ?散射光和反射光 ?非平行光 偏离Beer定律的因素 §4. 仪器 检测器 讯号处理系统 吸收池 光源 单色器 UV用D灯 Vis用W灯 准直镜 色散元件 混合光 单色光 进光狭缝 出光狭缝 UV用石英制； Vis玻璃、石英均可 光电池 光电管 光电倍增管 光二极管阵列 校正？ ?波长校正 486.13nm (F线) 656.28nm (C线) ? ?A 校正 K2CrO4 或K2Cr2O7 的硫酸溶液 ?吸收池校正：A(试样) A(参比) B(参比) B(试样) ? 杂散光：1.2% KCl溶液，H2O空白，200nm T ? 1.0% §5. 定量分析方法 定量 分析 ?吸收系数法 ?A=E?C?l ?标准曲线法 ?双波长法 ?线性方程组法 ?等吸收点法 ?倍率减差法 ? 三波长法 ?导数光谱法 ?光电比色法 ? 吸收系数法： ?标准曲线法： ? ? ? ? ? C A Cx Ax 0 标准溶液找出A与C 关系式，尔后测Ax ， 从图中找出Cx即可。 ?双波长法： A ? ?1 ?2 0 b a A ? ?1 ?2 0 b a 同理第二图： ?线性方程组法： A ? ?1 ?2 0 b a 先测知?1 , ?2 处各自的 吸光系数方可 ?等吸收点法： 两物质在某一波长处吸光系数相等 故 再另选适当波长?x 测A值即可 必须事先知道 ?倍率减差法： A ? ?1 ?2 0 b a 纯b组分 可测 故 需事先用纯a求出 ? 三波长法 A b a 0 ? ?1 ?2 ?3 m n 选三波长?1, ?2, ?3 干扰组分三点处在 同一直线上 整理后得 实测 三值 用纯b组分分别在 三个波长处测 ， 计算 用纯a配两个不同浓度在三个波长处测 计算k1和 k3 ?导数光谱法： 零阶 一阶 二阶 三阶 四阶 每隔一个波长间隔?A(1~2nm)逐步计算出?A/ ??的值,得一阶导数 …... * * * * *