微生物遗传育种 2.pptVIP

重离子束在微生物诱变育种中的应用 主讲人：郑宇华 　　组员：杜雪丽　尤丽 辐射诱变的机理一般被认为是基因重组或染色体 产生断裂而导致的基因突变或染色体畸变,具有不 可控制性、诱变谱狭窄和诱变能力低等缺点,因此 传统诱变源已展现出其局限性,若要开发新的具有 较好性能的实用突变体,则须寻找新的诱变源。 重离子辐照诱变育种技术的开展弥补了这一缺 点,为辐照育种研究注入了新的活力。重离子束特 别是低能碳、氮离子束对微生物与植物种子有很强 的致突变作用,将其应用于微生物诱变育种研究已取得了巨大的经济与社会效益[2,3]。 2重离子束辐照微生物诱变育种的理论基 础 2.1重离子束的特点及其在辐照育种中的优势 与传统的诱变源相比,重离子束具有以下重要 特点: (1)传能线密度(LET)大,能在生物介质中 产生高密度的电离、激发、能量和质量沉积,造成 生物介质的损伤,易于突变体的形成 重离子束与生物体相互作用时,在引起受体细 胞表面受损穿孔,细胞膜透性和跨膜电位改变的同 时,导致受体DNA 损伤,激活受体细胞的修复机 制,有利于外源基因主动进入受体细胞并与受体 DNA 进行重组和整合[5],以提高外源基因导入率, 克服转基因沉默并延长表达时间。同时,重离子束 介导外源基因不必通过与载体重组这一中间环节, 而且可以转导大片段DNA 甚至全DNA ,这就简 化了步骤,可以缩短周期和降低成本[6]。 此外,重离子参数多样,采用不同质量数、电荷 数和不同能量的重离子束,对生物体系做不同方 式处理,可获得多种不同需求的突变体,有利于拓 宽突变谱,提高突变率,特别是在兰州重离子研究 装置(HIRFL)的冷却储存环(CSR)建成出束后,可 供选择的重离子及其能量的范围将更为广阔。 ２.２重离子束诱变育种的基本原理及过程 重离子与生物体系相互作用是一个复杂的过 程。从离子注入到终点生物学效应,经历物理、化学 和生物学3个阶段,从微观生物分子损伤到宏观性状 的表现,其效应不断被放大。在此过程中离子束将同 生物细胞的电子和原子发生相互作用。起初,入射离 子的能量较高,主要同生物细胞中的分子和原子发生 非弹性碰撞,使生物分子发生电离或激发,产生电离 损伤[7]; 3重离子束辐照微生物诱变育种的研 究进展 自1994年报道了离子注入链霉菌的诱变效应以来,我 国在这一领域的成果不断。尤其是以中国科学院等 离子体物理研究所和中国科学院近代物理研究所为 首的科研人员,就离子束对微生物体的诱变机理及其 生物效应进行了深入的研究探讨,将其应用于工业菌 种的改良上,取得了理想的成果。 在抗生素药物方面,颉红梅等[１６]用40Ar14+ 离 子辐照庆大霉素产生菌绛红小单孢菌,所得突变株 的正变率为69.1%,效价从1150 mg/l提高到 3580mg/l;陈暋宇等[１７]用40—60keV、剂量1.0× 1011—5.0×1014ions/cm2的N+ 离子注入红霉素产生 菌,经筛选得到了高产突变菌株,摇瓶发酵后表明 其产量提高了20%;赵洪英等[１８]用30keV,剂量 1.0×1015—5.0×1016ions/cm2的N+ 离子注入庆 大霉素产生菌成熟孢子后,经筛选得到高产抗生素 突变菌株, 摇瓶发酵表明其产抗力提高了 27.39%;向暋砥等[１９]用离子注入选育高产壮观链 霉菌,初步实验结果其效价较出发菌株提高了102.3%。 在酶制剂方面,杨立峰等[２０]利用N+ 离子注入天 冬氨酸转氨酶高产菌株进行诱变选育,在20keV和 15×1014ions/cm２的注入条件下,得到一株酶高 产菌株,其转化苯丙氨酸的产量达17.10g/l,比出 发菌株提高23.76%,且遗传稳定性较好;吴庆勋 等[2１]通过N+ 离子注入米曲霉WJ0521,筛选得到 两株氨肽酶活力提高了30%的高产菌株M60－5－13 和M80－10－7,经多次传代实验表明两菌株遗传稳 定性良好,对M80－10－7 的发酵条件初步优化后, 进一步使产酶水平提高了77.5%。 重离子辐照诱变微生物菌种改良在色素[2２]、油 脂[2３]和多糖的生产中取得了比较理想的效果。尤 其值得一提的是,袁成凌等[2４]利用低能重离子对 花生四烯酸(AA)产生菌进行诱变筛选,得到一株花生 四烯酸高产菌株,其中,菌体油脂含量达33.8%,AA 含 量占菌体油脂总含量的52.36%,比对照组提高了126.2%,是美国专利水平的2.5倍。 ４问题与展望 随着遗传学和分子生物学领域的飞速发展，许多新 型复杂的技术被应用于菌种选育融合育种技术，但 是诱变育种技术仍是提供菌株生产能力的重要有效 手段。它获得的正突变率相对较高，可以得到多种 优良突变体和新的有益基因类型。另一方面，诱变 育种存在一定的盲目性和随机性，在实际应用中， 研究