人类结肠癌细胞抗增殖活性及其相关分子机理探讨.ppt

简意图 促分裂信号 CyclinD水平升高 CDK2 CDK4 cyclinD-CDK2 cyclinD-CDK4 pRb-E2F p-pRb pRb 磷酸化 E2F 活化相关基因的转录 细胞通过G1/S检控点，从G1期转变到S期 cyclinE-CDK2 继续磷酸化 cyclinA/B-CDK 维持高度磷酸化 不再结合E2F 进入 核内 增殖细胞核抗原 PCNA PCNA是一种由三个相同亚基组成的，总相对分子质量为29kD的环状同源三聚体蛋白，在细胞核内合成并分布于细胞核内，是真核生物DNA聚合酶的辅助蛋白。 PCNA的三聚体环形结构环绕着双链DNA，起到滑动发夹的作用，相当于原核生物DNA聚合酶Ⅲ的β亚基，极大地增强了真核生物DNA聚合酶的持续合成能力，而且PCNA也参与DNA的损伤修复。 P21的抑制作用 P21：一种细胞周期抑制蛋白 p21可以与cyclin-CDK复合物结合从而抑制CDK的激酶活性，进而使pRb不能维持磷酸化状态，而且cyclin-CDK的其他一些生物学活性也不能实现。最终将无法转录一系列与细胞周期时相转变（如从G1期转变为S期）相关的基因，从而导致细胞周期停滞。 P21与PCNA结合可以抑制PCNA与双链DNA的连接，从而抑制DNA的复制过程。 8e对细胞周期调控蛋白表达水平的影响 如蛋白质印迹图谱Ⅰ所示， （1）表达水平上调的因子有：细胞周期抑制蛋白p21； （2）表达水平下调的因子有： cyclin D1、 cyclin A、 cyclin E 、CDK2 、CDK4、 c-Myc 蛋白（原癌基因c-Myc的表达产物）、 pRb（视网膜母细胞瘤蛋白，是一种细胞周期抑制蛋白） 、 p-pRb（磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白）、 PCNA（增殖细胞核抗原） 结论：8e介导的G0/G1期的细胞周期停滞与周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21的上调和CDK2 、CDK4、 cyclin D1、cyclin A and cyclin E 的下调有关。 Part 2 名词解释1 1.表皮生长因子受体（EGFR）：一种可被胞外促有丝分裂因子（包括表皮生长因子、转化生长因子α 、双调蛋白和乙胞素）所激活的典型的酪氨酸蛋白激酶受体（RTK，245页）。很多癌细胞，包括结肠癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌和头颈部鳞癌等癌细胞都有EGFR过分表达的现象。 2.雷帕霉素靶蛋白（mTOR）：广泛存在与各种细胞中，在细胞增殖、迁移、分化和生存中发挥重要作用，而且也是Akt（丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）促进细胞生存和抑制细胞凋亡的下游靶标。同时mTOR也通过激活激酶P70S6K和抑制翻译起始因子eIF4E的抑制物4E-BP1来参与许多生存蛋白的起始翻译。 名词解释2 PIK3：磷脂酰肌醇3激酶（254页），也就是磷脂酶C（PLC，237页），可以将磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2，238页）水解为二脂酰甘油（DAG）和1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）。 Akt：又称PKB（蛋白激酶B），是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在细胞存活和凋亡中起重要作用。 PI3K-Akt信号途径是一条经典的信号途径。 ERK：细胞外信号调节激酶，是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族中的三大亚族之一，是哺乳类动物中了解的最为清楚的MAPK亚族，其信号传递通路为典型的MAPKKK/MAPKK/MAPK三级酶促级联反应，是调节细胞生长、发育以及分化的信号网络的核心。 名词解释3 c-Src ：是一种非受体酪氨酸蛋白激酶（即胞质酪氨酸蛋白激酶），其活化机制与受体酪氨酸蛋白激酶（RTKs）相似，同样需要自身磷酸化和受体二聚化。 mTOR： 雷帕霉素靶蛋白， 通过与多种蛋 白结合成2种复合物 mTORC1和mTORC2 发挥其生理功能。 STAT ：信号传导及转录激活因子，可被特定的酪氨酸激酶（如c-Src ）磷酸化为p-STAT，p-STAT发生聚合形成同源或异源二聚体活化态，进入核内与靶基因启动子序列的特定位点结合,促进其转录。已成功克隆4种JAK(JAK1~3和Tyk2)与7种STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6)。 EGFR激活后有3条胞质信号通路： ① MAPK通路 ② PIK3通路 ③ c-Src通路 真核细胞内已发现的激活mTOR的信号通路： ① PI3K / AKT / mTOR ② Ras /MAPK /mTOR ③ AMPK /mTOR （ AMPK 是腺苷酸活化蛋白激酶） ④氧气 / mTOR ⑤氨基酸 / mTOR 构成EGFR/mTOR信号通路 1 2 3 TSC1 /2和Rheb是连接Akt和复合物mTOR1 的两个因子 PI3K / AKT