甲醛滴定法测定氨基酸含量.docVIP

实验4 甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。三、材料、试剂与器具（一）试剂1、0.5%酚酞酒精溶液称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。3、1%甘氨酸溶液取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液5、中性甲本醛溶液取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。（二）实验器具1、锥形瓶 2、碱式滴定管移液管洗耳球 4、天平5、容量瓶 6、试剂瓶7、量筒 8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、取3只100ml锥形瓶，按下表加入试剂。 锥形瓶编号试剂样品1样品2空白1%甘氨酸溶液或样品（ml）2.02.0—蒸馏水（ml）5.05.07.0中性甲醛溶液（ml）5.05.05.00.05%溴麝香草酚蓝溶液（滴）2220.5%酚酞乙醇溶液（滴）4442、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）； 1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量（mg）五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。六、实验报告 根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。，七、思考题1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？