实验六 枯草杆菌蛋白酶活力的测定6.pptVIP

实验六 枯草杆菌蛋白酶活力的测定 (先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度) 一、实验目的 二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂 四、实验操作 五、思考题 一、实验目的 掌握定量测定蛋白酶活性的方法，了解本实验的酶、底物和生成物的相关性质，以及本反应的环境条件。 进一步理解酶活力和比活力的概念 巩固比色法测定物质含量的基础,掌握721型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法 二、实验原理 1．酶活力概念: 指专一性催化某种底物反应的能力，酶活力通常用一定条件下酶催化某种反应的反应速度来表示. 活力单位(国际单位IU,katal) 2.枯草杆菌蛋白酶是一种水解酶，它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。 酪氨酸能与酚试剂反应成蓝色物质. 酚试剂又名Folin试剂，是磷钨酸和磷钼酸的混合物，它在碱性条件下极不稳定，可被酚类化合物还原产生蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物,680nm）用分光光度计可以定量的比较颜色的深浅，从而推导出酪氨酸的量，根据生成物的含量可以计算枯草杆菌蛋白酶的活力。 3.枯草杆菌蛋白酶活力单位定义：在40?C，pH7.5的条件下，水解酪蛋白每分钟产生1 ?g酪氨酸为1U。 三、器材仪器和主要试剂 721 型分光光度计 Folin 试剂甲液，乙液 0.5% 酪蛋白 100 μ g/mL Tyr 溶液  四、实验操作 1、酪氨酸标准曲线的制作 2、蛋白酶活