实验四 蛋白酶活力的测定6.pptVIP

实验四 蛋白酶活力的测定 (先打开水浴锅，温度设置成40?C) 一、实验目的 二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂 四、实验操作 五、思考题 六、值日 一、实验目的 掌握定量测定蛋白酶活性的方法，了解本实验的酶、底物和生成物的相关性，以及本反应的环境条件。 进一步理解酶活力和比活力的概念 巩固比色法测定物质含量的基础，掌握分光光度计使用方法，学习绘制标准曲线的方法 二、实验原理 1．胰蛋白酶是一种水解酶，将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。 2．所生成的酪氨酸能与酚试剂反应成蓝色物质。酚试剂又名Folin试剂，是磷钨酸和磷钼酸的混合物，在碱性条件下极不稳定，可被酚类化合物还原产生蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物，680nm）。 3．用分光光度计可以定量比较颜色深浅，测定酪氨酸生成量，根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。胰蛋白酶活力越高，生成的酪氨酸越多。 4. 蛋白酶活力单位定义：在40?C，pH7.5的条件下，反应10min，以每min水解酪蛋白产生1 ?g酪氨酸为1U。 三、器材仪器和主要试剂 可见光分光光度计 水浴锅 Folin –酚试剂 0.5% 酪蛋白 100 ?g/ml Tyr 溶液 三氯醋酸 Na2CO3 胰蛋白酶 四、实验操作 1、酪氨酸标准曲线的制作 2、蛋白酶活力的测定 按下表操作，然后测定滤液中的酪氨酸含量。 滤液各