金黄色葡萄球菌检验与计数ppt课件_1.pptVIP

金黄色葡萄球菌检验与计数;概况;金黄色葡萄球菌的生物学特性;培养特性： 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧。 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。 ;在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。 ;金黄色葡萄球菌的酶;金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。;耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。218~248 ℃的油中需30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。;A型肠毒素毒力较强，摄入1μg即可引起中毒；B型毒力较弱摄入25μg，才引起中毒。一般认为引起人中毒的最小剂量是1.0~7.2μg/kg。 ;金黄色葡萄球菌检验;金黄色葡萄球菌的检测程序;增菌培养基;样品的稀释;增菌与分离培养;分离培养基;长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。 ;;分离培养基;金黄色葡萄球菌的重要鉴定-血浆凝固酶试验 ;血浆凝固酶试验 ;同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。 结果如可???，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI，36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。 ;结果报告;影响血浆凝固酶试验的因素;不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落做血浆凝固酶的实验，因所有高盐培养基都可以抑制A蛋白的产生，造成假阴性结果。 不要用力振摇试管，以免凝块振碎。 实验必需设阳性(标准金黄色葡萄球菌)、阴性(白色葡萄球菌)、空白(肉汤)对照。 玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。因此，两种试验所得结果可完全不同。 玻片法只用于筛选。; 金黄色葡萄球菌计数;第一法 Baird Parker 平板法 第二法MPN法 第三法PetrifilmTM测试片法;第一法:平板计数法;检验程序;样品的接种、培养与典型菌落的确认;典型菌落计数与计算公式的应用;公式一的使用范围： ---最低稀释度平板的菌落小于20 cfu，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在20 cfu～200 cfu之间，计数该稀释度平板上的典型菌落； ;公式一;公式应用例一;N=∑T/1.1d ∑T：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌菌落总数之和； d：稀释因子(第一稀释度)。 公式二的使用范围：平板菌落数均在20 cfu～200 cfu之间。 公式引用于ISO 6888-1:1999(E) ;公式应用例二;结果报告;第二法 MPN法;MPN检验程序;接种和培养;结果报告;注意要点;第三法PetrifilmTM测试片法;适用范围;PetrifilmTM测试片法检验程序;第三法 PetrifilmTM测试片法;金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片;计数与结果报告;如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以()1乘以最低稀释倍数报告之； 如果最高稀释度的菌落数大于150个时，计数最高稀释度的测试片上的菌落数乘以稀释倍数报告之，计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以30即为测试片上估算的金黄色葡萄球菌数 (圆形生长面积为30 cm2)。 最终菌落浓度的单位以”cfu/g (mL)”表示。;谢谢!