《结核病的实验室诊断》ppt课件.ppt

结核病的实验室诊断;主要内容;1.结核病的流行概况;2011 WHO tuberculosis control report;全球的结核病患者,在接受治疗之前已经传染给了别人！！！;当前结核研究的热点; */45;2.结核病的病原学 ;结核分枝杆菌(M.tuberculosis);生长特点： 生长缓慢，繁殖一代在人工培养基内约需要15～20小时，在静脉感染未经免疫小鼠肺中约需要15小时，在巨噬细胞内约需要15～20小时，在家兔角膜中约需要20～22小时。;实验室检查方法的历史;3.结核病的实验室诊断;①.细菌学诊断;萋尼氏染色;;萋尼氏染色镜下形态;荧光染色镜下形态;LED Fluorescence microscopyLED荧光显微镜;LED 荧光显微镜;普通荧光显微镜和发光二极管荧光显微镜性能比较（不同实验室的结果进行汇总与平均）;　;;MGIT /3D制造的液体培养基;②血清学诊断;WHO对来自不同国家的19种试剂盒产品进行评估，结果表明：与痰培养相比，这些试剂盒检测的灵敏度为1%~60%，特异度为53~99% 1 。 原因：由于所用的测定方法、使用的试剂种类或抗原、抗体的不同等，导致测定结果差异较大，并且缺乏可比性。 WHO认为现有的血清学诊断试剂的敏感度和特异度都有待进一步提高，不推荐其作为一种快速诊断的方法在临床使用。 1WHO World Health Organization. Diagnosis evaluation series No.2: laboratory-based evalution of 19 commercially available rapid diagnostic tests for tuberculosis.2008.;2011年WHO正式公告：由于目前的商业血清学试剂在结核检测中存在较大差异，且检测结果很高比例的假阳性和假阴性，因此不建议使用血清学方法作为结核杆菌的诊断实验1 。 1WHO Commercial Serodiagnostic Tests for Diagnosis of Tuberculosis. /publications/2011/9789241502054_eng.pdf 不能早期诊断！容易漏诊、误诊！;结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。 由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。 基于IGRA原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、德国、意大利、瑞士、法国、荷兰、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中。 目前应用的进口IGRA主要有两种商品化的试剂： 1）澳大利亚Cellestis公司的 Quanti FERON-TB GOLD In Tube（QFT-GIT） 2）英国Oxford Immunotec公司的T-SPOT.TB;γ-干扰素释放实验（IGRA）;T-SPOT?.TB原理;结核杆菌特异抗原;结核杆菌特异抗原;T-SPOT?.TB临床性能指标;灵 敏 度;特 异 性;T-SPOT?.TB的实验步骤;阴性结果;方法学的优点;方法学的局限;实验结果的解释;各国对潜伏感染风险人群的筛查指南;样本量为26 680 调查者的15个多中心研究显示,在4年的随访中,IGRA-阳性的个体中发病数为4~48 例/1000人/每年. ;TB-DNA检测： 1. 能稳定检测10copy的TB-DNA ，灵敏度高 ，特异性强。 2. 早期、快速、准确地诊断结核病。 痰液、肺及支气管灌洗液——肺结核 血液——播散性结核和各脏器的结核病 　 脑脊液——中枢神经系统结核病 宫颈拭子、尿道拭子——泌尿生殖道结核病 3. 荧光定量PCR检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和改良罗氏培养法。 4. TB-DNA浓度可用于判断疗效： 痰标本中结核杆菌的数量呈逐渐下降趋势 ，TB-DNA拷贝数下降。根据病原体DNA浓度，对药物治疗及疗效观察提供参考依据 。;; 环介导等温扩增法(LAMP)的技术特点是针对靶基因的6个区域设计4 条特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件(63-65℃)下保温30－60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，具有简单、快速、特异性强的特点。;2小时全过程;检测方法说明;RNA作为临床分子诊断靶标的优点：;SAT技术原理;操作过程;4. 结核病的分子药敏;药物;原理：