多肽抗原的设计与抗体制备 课件.ppt

多肽抗原的设计与抗体制备;;;抗体制备常用的免疫原;免疫原性肽选择的基本程序;免疫原性肽选择的注意事项;利用Swiss-Prot数据库辅助设计;;;;;;多肽的固相合成;;合成原料;;标准合成程序;标准切割程序;;多肽合成的一般常识;;TIE1 SR00043 DRPEETSTIIRGLN ;BAG4： SR00079 LRRSGYGPSDGPSY ;SR00007 Dicer GKVRVTVEVVGKGK ;多肽的鉴定和纯化;质谱分析（MS/ESI）;TPTE SR00283: (CH3CO)RVSENKRRYTRDGFC MW：1887.13+42=1929.13;TNFRSF13B SR00306 （NH2）PELRRQRSGEVENNSD MW：1885.99;;多肽脱盐（凝胶过滤法）;表 葡聚糖凝胶(Sephadex )的物理特性;多肽脱盐条件选择;SR0002脱盐结果;多肽RL-HPLC分析;SR0001多肽的RL-HPLC分析;;;;多肽的溶解和保存;;多肽的保存;多肽偶联;载体蛋白选择;交联方法;;;;;典型的错误偶联方式;正确的偶联方式在其C端加上一个C，用MBS法;;Location in the native protein;肽与载体蛋白偶联结果观察;偶联结果：SDS胶考马斯亮蓝染色;;;多肽免疫;;多肽免疫注意事项;兔子取血和血清保存;抗多肽抗体的检测和功能学鉴定;实验步骤;结果观察;抗体纯化;亲和纯化;多肽抗体的纯化结果;纯化抗体考马斯亮蓝染色结果;;将SROOO2甘洗脱(1)高值5.5ml，甘洗脱(2)高值3.2ml,甘洗脱(2)低值8ml，甘洗脱(3)高值2.7ml,甘洗脱(3)低值2.7ml,三乙胺洗脱（3）高值3.3ml收集在一起共25ml，加入NaN3至终浓度0.05%，BSA至终浓度0.5%。混合后的抗体再次进行Western 检测，结果见下图：;纯化抗体考马斯亮蓝染色结果;将不同次纯化的抗体混合后考马斯亮蓝染色结果;SR0004 DGCR8 LHILSKLQEEMKRL; SR0004 小量纯化抗体考马斯亮蓝染色结果;SIP0002 (C-myc) EQKLISEEDL;SIP0002 C-myc小量纯化的抗体考马斯亮蓝染色结果;寻找原因;利用Internet 免费资源寻找与抗体相关的信息;;;;TOP2A;可能的影响因数;