伤寒副伤寒血清学诊断（一）肥达（Widal）试验方法试管法步ppt课件.pptVIP

第八部分 传染病的免疫学检测 一 、伤寒、副伤寒血清学诊断 （一）肥达（Widal）试验 方法：试管法 步骤：试管编号?稀释病人血清?+菌液?混匀, 放置16-20小时?观察结果。? 结果判定 : 以出现++凝集的血清最高稀释倍数为该血清的 凝集抗体的效价 ; 正常值： O≤1:80；H≤1:160 临床意义： 1. “O”和“H”均高于正常值，可考虑为伤寒；恢复期较急性期增长4倍以上确定诊断。 2. “O”抗体（IgM）出现较早， “H”抗体（IgG）出现较晚 3. 病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。;（二）酶联免疫（ELISA）试验 方法：抗原(伤寒杆菌脂多糖或Vi抗原)包被? +待测 血清 ?+第二抗体（酶标记）?底物显色 参考值：1:20 临床意义： 1. 早期诊断(发病1周后即可升高） 2. 检测抗Vi抗体，可以诊断伤寒带菌者 ; 二、抗链球菌溶血素“O”测定 —— 溶血抑制法 原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染链球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特异性结合，使之失去溶血作用 方法：病人血清 ? 倍比稀释 ? ＋溶血素 ? +红细胞 ? 观察溶血现象 结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为ASO的单位数。 参考值：ASO400U 临床意义： 1. 链球菌感染1周，ASO↑，4～6周达高峰。 2.风湿热：ASO↑。;三、肝炎的免疫学检测 （一）甲型肝炎（HAV）的免疫学检查： 1. 粪便中HAV抗原的检测 ELISA夹心法 方法：①标本处理：待测粪便+牛肉汤盐水?冻融?离心取上清(即待测抗原)；②包被抗体； ③加待测标本；④加酶标抗体(HRP-抗甲肝IgG)；⑤加酶底物；⑥测定OD492。 结果判断： 待测标本OD值 ——————— ≥ 2.1阳性 阴性对照OD值;2 抗HAV-IgM的检测 抗体捕获ELISA法 方法：抗人μ链包被 ? +待检血清(含抗HAV-IgM) ? +HAAg ? +HRP-抗HAV-IgG?+酶底物?测定OD492 。 结果判断： 待测标本吸光度值 ————————≥2.1阳性 阴性对照吸光度值 临床意义：发病4周后，几乎全部患??抗HAV-IgM 为阳性，用于甲肝诊断。 检测抗HAV-IgG可用于流行病学调查。;（二）乙型肝炎的免疫学检测 1. HBsAg的检测 ——反向间接血凝试验 方法：致敏红细胞(抗HBsAg＋RBC)? ＋患者血清 (含HBsAg)?凝集 ;2.抗HBs检测 ELISA抑制法 方法：抗HBs包被 ? +HBsAg(已知浓度)? +待测标 本? +HRP-抗HBs ? +酶底物 ? 目测或测 定OD492 结果判定： 目测：阳性孔－无色或浅黄 阴性孔－桔黄色 OD值测定： 0.5 ; 血中HBV标志物检查法及其阳性意义 标志物 常用检测法 阳性意义 HBsAg ELISA夹心法 正在或曾经感染 抗-HBs ELISA抑制法 曾感染或疫苗注射 抗-HBc(IgM类) 抗体捕获ELISA 发病期，慢性恶化期 抗-HBc(IgG类) ELISA抑制法 曾感染，急性恢复期 HBeAg ELISA夹心法, RPHA HBV复制，感染性强 抗-HBe ELISA抑制法， PHA 急性感染，趋向恢复 HBV-DNA PCR法 HBV复制 前S2Ag