针对toxR基因建立环介导等温扩增法检测副溶血.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT - 8 -  针对toxR基因建立的环介导等温扩增（LAMP）法检测副溶血性弧菌=Development of a toxR-based loop-mediated isothermal amplification assay for detecting Vibrio parahaemolyticus [关键词] toxR基因；等温扩增（LAMP）技术检测；副溶血性弧菌 本研究通过toxR建立了高特异、敏感的环介导等温扩增（LAMP）技术检测牡蛎中的副溶血性弧菌。根据已有的toxR序列设计了5对引物，使用36株副溶血性弧菌和其他39株菌株进行了特异性检测；使用ATCC 27969菌株，进行了灵敏度实验，梯度稀释从108CFU/ml到0。该方法具有很好的特异性，纯培养中的检出限为47-470个细胞，是普通PCR的100倍；不用富集可以检测到每克牡蛎样品中的1.1×105个副溶血性弧菌细胞，达到普通PCR 100倍以上的灵敏度。纯培养和牡蛎样品中检测时的标准曲线表明细胞数量与荧光或浑浊度信号间有很好的线性关系