中国科大遗传学实验.doc

遗传学实验 张文锐 黄丽华 高永翔 编 中国科学技术大学 生命科学学院实验教学中心 目 录 实验一 有丝分裂（Feulgen染色）制片技术 　 3 实验二 减数分裂制片技术　　　　　　　　　　　　　　　　　 7 附：临时制片与永久制片技术 实验三 果蝇的形态、生活周期及饲养ABO血型检查 40 实验十三 人类X染色质的观察 42 实验十四 小白鼠骨髓细胞染色体制片技术 45 实验十五 小白鼠骨髓细胞染色体显带（Ｃ带）技术 48 实验十六 人体外周血淋巴细胞培养及染色体制片 51 实验十七 人类染色体核型分析 54 实验十八 植物染色体组型分析 57 实验十九 植物染色体显带技术和带型分析 61 实验二十 同功酶遗传标记分析 65 实验二十一 荧光原位杂交实验 70 附录一：X2 测验表 75 实验一 有丝分裂（Feulgen染色）制片技术 一、实验目的 1、通过本实验的学习，初步掌握植物染色体制片，奠定细胞遗传学研究的基本技术； 2、通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化； 3、掌握Feulgen染色方法。 二、基本原理 有丝分裂（mitosis）是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，每天都有分裂高锋时间，此时经预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，在显微镜下可以观察到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 孚尔根染色法是鉴别细胞中DNA反应的组织化学方法。细胞内的DNA(通常位于核及染色体上)在1N HCl 60℃水解时部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键而使嘌呤碱脱掉，从而使脱氧核糖的第一个碳原子上潜在的醛基获得了自由状态。而无色的亚硫酸品红是由偏重亚硫酸钠、盐酸和碱性品红配制成的。偏重亚硫酸钠与盐酸能产生亚硫酸根，当具有醌式结构的碱性品红分子与亚硫酸根结合后，醌式结构的共轭双键被打开，碱性品红变为无色。当用这种无色的亚硫酸品红去染经酸解的细胞时，就会与染色体DNA上游离的醛基结合，又出现了呈现红色的醌式结构，从而使DNA分子着色。这一反应是1924年由Feulgen 和Rossonbek 所发现和确定的，已广泛用作鉴别DNA的一种特异性检查方法。 三、材料和器材 实验材料： 蚕豆（Vicia faba, 2n=12）（或其它植物）干种子；洋葱（Allium cepa, 2n=16）根尖。 2、实验仪器及用具： 水浴锅(60℃水浴)、显微镜、培养箱、电子天平、酒精灯、100℃温度计、具塞试管、吸管、滤纸条等。 3、药品和试剂： 卡诺氏固定液（冰醋酸:无水酒精=1:3）、秋水仙碱（或8－羟基喹啉）、无水乙醇、1N HCl、 45(醋酸、0.2(秋水仙素、碱性品红、偏重亚硫酸钠（钾） Schiff试剂的配制 Schiff试剂：即脱色亚硫酸品红。溶解1g碱性品红于200ml 煮沸的重蒸馏水中，轻加摇动。继续煮5分钟使之完全溶解，冷却至50-55℃时过滤到棕色试剂瓶中，冷却至25℃时，加入20ml 1N HCl和1-3g偏重亚硫酸钾(K2S2O5)或偏亚硫酸钠(Na2S2O3)。摇动使溶解，密闭瓶口置黑暗低温处或冰箱内(4℃左右)18-24h后检查。溶液呈无色透明或淡黄色即可。如有不同程度的红色，可加入0.5-1g活性炭，激烈震荡1分钟，仍在低温下静止1小时或过夜。然后用粗滤纸迅速过滤后使用。密封瓶口，包以黑纸，在0-5℃可以保存5-6个月。 偏重亚硫酸钾(K2S2O5)或偏亚硫酸钠(Na2S2O3)与1N HCl反应，放出SO2、 SO2与碱性品红反应生成碱性品红 —— 亚硫酸溶液，呈无色。 漂染液的配制 取10%亚硫酸钠10 ml，加200 ml蒸馏水，再加10 ml1N HCl即可。 四、实验方法和步骤 1、