荧光标记白的发展.pptVIP

荧光标记蛋白的发展;荧光标记蛋白技术实际上是也是一种标记技术。就如同最早用P标记脱氧核糖核酸用S标记蛋白质是一样。;荧光标记蛋白在生物研究反面的作用：荧光标记蛋白的基因可作为报告基因，提供细胞内物质的跟踪定位 ;如左图所示，当体内物质融合了荧光蛋白后会发出荧光，用显微镜、荧光计、荧光激活细胞分选仪等就可以看见，若在靠近体表处且光源强烈则肉眼可视。; ①最早为水母体中提取的GFP②在适当刺激下会改变结构从而发出或改变荧光的第二类荧光蛋白FHP及其典例GPAC ③最新的PRIME技术;GFP;2，GFP发光原理 GFP控制光的部位是其自身的一部分，仅由氨基酸构建而成，该部位含有一段三个氨基酸组成的特殊序列：丝氨酸－酪氨酸－甘氨酸（有时丝氨酸会被相似的苏氨酸取代）。当蛋白质链折叠时，这段短片段就被深埋在蛋白质内部，然后，发生一系列化学反应：甘氨酸与丝氨酸之间形成化学键，生成一个新的闭合环，随后这个环会自动脱水。最终，经过大约一个小时的反应，周围环境中的的氧气攻击酪氨酸的一个化学键，形成一个新的双键并合成荧光发色团。;3，与其他报告基因不同的性质 ①从生化角度来讲, 所有已知的荧光素酶都是氧化酶, 它利用分子氧来氧化底物, 使产物分子处于一种激发态而发光。这种酶/底物的相互作用是生物发光的普遍模式。 而GFP 是第一个例外, 它的27kDa 的单体由238 个氨基酸构成, 本