负荷尿中维生素B2测定-荧光法.pptVIP

维生素B2 维生素B2（核黄素） 代谢活性形式：FMN，FAD 生理功能：辅酶 生物氧化还原反应中的电子 传递的中间体 维生素B2缺乏 口腔：口角炎，唇干裂，地图舌 皮肤：脂溢性皮炎等 眼： 对光有过度敏感的反应等 食物中维生素B2来源 实验目的 应用尿负荷试验评价人体维生素B2营养状况 实验原理 代谢角度： 水溶性维生素，在机体内存留时间短，满足机体需求后，多余部分迅速 从尿中排出。 当日常摄入量达不到机体需要量时，摄入的维生素制剂将首先留在体内满 足机体需要，从而尿中排出量较少，反之亦然。 因此，可由尿中排出的维生素量来判断体内水溶性维生素的水平 实验原理 方法角度 荧光化合物，在一定波长的光波照射下发黄绿色荧光。 荧光分析法，荧光强度F与溶液浓度C成线性关系—— F=KC 仪器与试剂 荧光光度计 酸性水：取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水至200ml; 核黄素储备液(已配好)：100μg/ml。酸性水配制，棕色瓶低温保存 核黄素标准应用液：1μg/ml。吸取核黄素储备液1ml，用酸性水稀释 至100ml，棕色瓶低温保存，现用现配； 低亚硫酸钠（荧光熄灭剂） 总尿量:670ml 操作步骤 1 收集负荷尿 清晨排空小便后，空腹口服维生素B25mg，根据季节饮水200-500ml，收集 服药后4h内所有尿液，并在瓶中加入1g左右草酸，使尿液保持在PH3-5， 防止维生素B2降解，必要时还可加甲苯防腐。用量筒量取总尿液量并记录， 做好标记后4℃短期保存，-20℃长期保存。 测定前读取尿液PH值，确保其在PH3-5。 3 负荷尿维生素B2测定： 负荷尿维生素B2的测定 标准管 样品管 尿样(ml) 1 1 B2标准应用液(ml) 1.5 0 酸性水(ml) 7.5 9 混匀 荧光光度计读值（420、530nm） C A 低亚硫酸钠 1平匙 1平匙 混匀 背景荧光值（420、530nm） D B 注：标准管和样品管要分别再做一只平行管，最后计算的时候，取平均值。 结果计算 缺乏 （μg） 不足 （μg） 正常 （μg） 充裕 （μg） ＜400 400 ～ 799 800 ～ 1300 1300 A-B 总尿量(ml) 尿中核黄素含量（μg）= [(C-D)-(A-B)] ×内标核黄素量（μg）× 分析用尿量(ml) F=KC ﹦〉C=F/K, K=F/C ﹦〉 K= [(C-D)-(A-B)]∕内标核黄素量 注意事项 避光操作，酸性体系，迅速操作； 低亚硫酸钠不能加入过多，否则影响吸光值，加入后必需立即读数，否则维生素B2又会被空气氧化成荧光型； 拿比色皿侧棱，并保证比色皿四面清洁； 注意标准品的配制及保存； 若尿液过于浑浊，可过硅镁层析柱后再进行测定等。 下周一，把作业交到620办公室。