流式细胞仪的技术.pdf

第十七章 流式细胞仪分析技术及应用 第一节 概述 一、工作原理 二、散射光的测定 三、荧光测量 四、细胞分选原理 第二节 数据的显示与分析 一、参数 二、数据显示方式 三、设门分析技术 第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求 一、免疫检测样品制备 二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色 三、免疫胶乳颗粒的应用 四、流式细胞免疫学技术的质量控制 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析 三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型 四、肿瘤耐药相关蛋白分析 五、AIDS病检测中的应用 六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析 七、移植免疫中的应用 思考题 小结 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式 细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对 单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分 选的新技术。 流式细胞术的特点 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及 细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下， 通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种 信号对细胞进行定量分析或纯化分选。 细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量 第一节 概述 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧 光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分 析和分选基础上发展起来的对细胞的物 理或化学性质（如大小、内部结构、 DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速 测量并可分类收集的高技术。 流式细胞仪常检测的细胞特性 细胞组成 细胞功能 大小 细胞表面/胞浆/核--特异性抗原 粒度 细胞活性 DNA, RNA含量 胞内细胞因子 蛋白质含量 激素结合位点 钙离子, PH值, 膜电位 酶活性 一、工作原理 采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发 效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检 测的灵敏度和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数 信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确 性。 1.流式细胞仪的基本结构： （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统 （1）液流系统 • 由样本和鞘液组成 • 待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的 单抗对其染色 受清洁气体压力 从样品管进 入流动室形成样本流 • 鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是 包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心 位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 液流系统示意图 喷嘴 鞘液 Fluorescence signals Focused laser beam FCM的液流系统（如 何形成单个细胞流） 鞘液管