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高效薄层色谱实践 现代薄层色谱技术发展概况 The state of the art in modern Thin-Layer Chromatography 1 2 Eike Reich , Anne Blatter , CAMAG–Laboratory, Sonnenmattstrasse 11,CH-4132, Muttenz, Switzerland 1． 介绍 薄层色谱（TLC ）是最早发明的色谱技术之一，并且至今仍是现代实验室不可或缺的分析手段。 其中的一个重要原因是唯有 TLC 能够提供图像用以直接观测并传达色谱结果。另外，超强的灵活性、 分析时间短、分析每一样品花费低也是其优点。图 1 显示的是同一块薄层板上两种紫锥菊（紫锥菊， 狭叶紫锥菊）及其不同比例混合物的指纹图谱。全部分析所需时间包括点样、展开、显色和照相约只 需约 20 分钟。两个不同种类的样品可以通过标示物质清晰地予以区分，混合物的组成可通过与标示 物斑点对比颜色深浅半定量估算，或采用光密度扫描定量分析获得更准确的定量结果。 图 1 HPTLC 分离紫锥菊属植物根提取物 从左到右分别为：海胆苷、咖啡酰酒石酸、紫锥菊、紫锥菊－狭叶紫锥菊（75％:25％）、 紫锥菊－狭叶紫锥菊（50％:50％）、紫锥菊－狭叶紫锥菊（25％:75％）、狭叶紫锥菊、 洋蓟酸、菊聚酸。 由于 GC/GC-MS，HPLC/HPLC-DAD-MS 的分离效果好、结果可靠、准确性高，已成为当今首选 的色谱技术。然而，人们也许会问，是否需要仅仅为了得到一个简单的结果而投入巨大的财力物力进 行分析，例如那些伪品和杂质的鉴别和测定，薄层色谱展开后衍生得到的的彩色条带就很有用，可作 为扩展信息，只需一张图像就可解决。TLC 不但是一种应用广泛的分析手段，并且可以以很小的投入 得到很好的结果，同时可作为其它技术的补充。 1 CAMAG 文献中文版（2005 年 5 月）• 瑞士卡玛中国技术支持中心 • info@ 2 ． 基本概念 a． 方法学 TLC 是一项离线色谱技术，所有步骤独立（包括点样、展开、衍生、照相、检测和计算等），按 照时间和位置分割，这就提供了非常广的灵活性。同时，许多的独立参数对分析结果会产生影响。由 于薄层板是一次性使用的，这就确保了所有的样品和标准品在完全一致的条件下分离。同样的原因， 在薄层色谱中样品基质对固定相的污染不是问题，不象柱色谱那样，而且展开后的色谱保存在薄层板 上，可用不同参数进行多次计算，不必重复分离。另一方面，TLC 是一个开放系统，结果受到许多因 素影响，例如实验室中的光线、氧气、烟雾、湿度和尘埃等，因而实际操作中要将尽可能多的参数— —尤其是展开室的立体结构和饱和、点样体积和溶剂及薄层的类型和活性——标准化并保持固定。 b． 固定相，TLC 对 HPTLC 高效薄层色谱（HPTLC）采用涂层颗粒直径为 5μm 左右，并且直径分布窄的高效预制板，和传 统的普通 TLC 板相比，分离度高（表 1）。 采用 HPTLC 板能提高分辨率，进行光密度扫描时能降低背景噪音，检测限较普通 TLC 低一个数 量级，展开时间和试剂消耗也显著降低，因而 HPTLC 薄层板已逐渐取代普通 TLC 板成为主要应用的 固定相。图二是用 TLC 和 HPTLC 板分离熏衣草油的比较。HPTLC 采用一次展开，耗时 8min ，与 TLC 两次展开，展距 15cm，耗时 35min 的效果相当。事实上可以说 HPTLC 没有理由不成为首选的 固定相。 表 1 高效 HPTLC 与普通 TLC 薄层板的比较 参数 TLC HPTLC 平均颗粒度 10-15μm 5-7μm 颗粒度分布 宽 窄 涂层厚度 250μm 100，200μm