带你认识真正的talent技术-斯丹赛talent技术讲座幻灯片.pptVIP

* ` 打靶示意图（定点缺失） 打靶效率经验参考 建立knock-out细胞系（双拷贝敲除）： 293T，hela细胞：建系成功率100%，目前成功建系19个，打靶效率约为30 % -70%，最短耗时2个月 ES/iPS细胞：建系成功率100%，目前成功建系7个，打靶效率约为20 % -50%，最短耗时4个月 数据统计至2013.07月 打靶效率经验参考 建立knock-in细胞系（单拷贝敲入） ： 293T、hela细胞等：建系成功率100%，目前已成功建系6个，打靶效率约为20 % -55%，最短耗时3个月 ES/iPS细胞：建系成功率100%，目前已成功建系2个，最短耗时5.5个月，打靶效率约为10 % -28% 数据统计至2013.07月 成功实例2 动物模型—斑马鱼 Zebra fish-gene A WT TALEN 580bp Zebrafish-geneA (Kpn I) WT TALEN 580bp 401bp 179bp Genomic PCR Restrictive enzyme digest 斑马鱼内XX基因敲除 结果回馈 我方设计TALEN识别序列； 提供最终的TALEN质粒 TALEN质粒线性化； 体外转录 显微注射一细胞期受精卵 48h后收集，抽提胚胎 基因组DNA PCR扩增，酶切看结果 打靶效率为80%以上 应用实例3 动物模型——小