含砷中药复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征克隆选择性与砷体内效应相关性研究.docVIP

含砷中药复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征克隆选择性与砷体内效应相关性研究 　　摘要：目的 探讨含砷中药复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征（MDS）的克隆选择性与砷体内效应的相关性。方法 对接受口服青黄散（每日雄黄0.16 g）治疗的MDS患者40例（治疗组）进行疗效评价，分析MDS患者口服青黄散后血砷浓度和线粒体膜电位（△Ψm），并与未服用青黄散或其他砷制剂的MDS患者（未治疗组）以及正常人（健康对照组）进行比较。结果 治疗组总有效率为75.0%（30/40）。伴随正常克隆与+8异常克隆患者的疗效明显好于其他异常克隆类型（P0.05）。治疗组线粒体△Ψm与未治疗组比较差异无统计学意义（P0.05）。治疗组线粒体△Ψm与全血砷浓度没有相关性（P0.05）。结论 口服青黄散治疗MDS，砷被人体少量吸收，并进入细胞内发挥作用。MDS患者对青黄散的治疗反应与全血砷浓度具有相关性。青黄散治疗MDS的克隆选择性与全血砷浓度以及线粒体△Ψm变化没有相关性。 　　关键词：骨髓增生异常综合征；青黄散；雄黄；砷；克隆选择性；线粒体膜电位 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.06.004 　　中图分类号：R259.513 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）06-0008-03 　　本院血液科应用含砷中药复方青黄散治疗恶性血液病已有50余年的历史[1-2]。目前，国内广泛应用砷制剂治疗恶性血液病，取得令人满意的效果[3]。砷在体内持续发挥作用，需要维持有效的血砷浓度。巯基是砷剂发挥作用的重要化学靶点，而线粒体是对砷剂作用最敏感的细胞器，砷剂与巯基结合后，导致线粒体通透性转运孔道开放，线粒体跨膜电位（membrane potentials，△ψm）下降或消失，诱导细胞凋亡[4]。 　　近年来，我们应用小剂量青黄散治疗骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS）亦取得了很好的疗效[1，5]。MDS是一组起源于造血干（祖）细胞的克隆性异质性疾患，高风险向白血病转化[6]。细胞克隆类型在MDS治疗选择与预后判断中具有独立的意义[7-8]。我们的既往研究显示，青黄散治疗MDS的疗效与MDS的克隆类型有关，正常核型与+8克隆异常者对青黄散反应较好，而其他克隆异常者反应较差[9-10]。本研究通过测定不同克隆类型的MDS患者治疗前后血液砷的含量、线粒体△ψm的改变，分析青黄散在不同克隆类型MDS患者的体内效应状况，探讨含砷中药复方青黄散治疗MDS克隆选择性的可能机理，为MDS的遗传学分型治疗提供依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　2010年2月-2012年4月于本院接受青黄散治疗的MDS患者40例，为治疗组，男性23例，女性17例，年龄9～81岁，平均（42.2±18.1）岁。30例未接受青黄散治疗的MDS患者作为未治疗组。10例正常人为本院职工，作为健康对照组。 　　1.2 治疗方法 　　治疗组：给予青黄散胶囊[本院制剂室提供，每粒含雄黄（As2S2）0.16 g]1粒/d，晚饭后立即服用。所有MDS患者加用补肾健脾中药汤剂（熟地黄30 g，山药10 g，山萸肉10 g，茯苓10 g，泽泻10 g，补骨脂15 g，菟丝子15 g，桑葚30 g，制何首乌20 g，党参20 g，炒白术10 g等），每日1剂，水煎，分2次服。就诊前服用雄激素治疗者仍继续服用，司坦唑醇2 mg/次，或十一酸睾酮40 mg/次，2～3次/d，口服，葡醛内酯100 mg/次， 3次/d，口服。其他西药如环孢菌素A、沙利度胺、促红细胞生成素等入组前均停用。若血红蛋白50 g/L，血小板计数20×109/L，输注成分血。3个月为1个疗程，2个疗程后判断疗效。 　　未治疗组：MDS初诊或就诊前服用雄激素或/和环孢菌素A，不使用青黄散以及其他含砷制剂。 　　1.3 疗效标准 　　参照2000年国际工作组指定的MDS疗效标准[11]，分为有效（包括完全缓解、部分缓解、血液学进步）和无效（治疗失败）。 　　1.4 砷浓度检测 　　血样标本采集时间在服药后10～12 h，采用高效液相色谱（HPLC）与电耦合等离子体质谱（ICP-MS）联用技术对全血及血浆进行砷浓度的检测，检出限：总砷0.03 ?g/L。 　　1.5 线粒体膜电位测定 　　取EDTA抗凝骨髓液2 mL，分离单个核细胞，取1×106个细胞，按照JC-1试剂盒说明，标记JC-1荧光，用流式细胞仪测定。FL1（绿色荧光）的PMT值为525 BP，FL2（红色荧光）的PMT值为575 BP。用FL2/FL1的荧光强度比值反映线粒体△Ψm。 　　1.6 克隆类型的确定 　　骨髓细胞经24～48 h培养