GB/T 17813-1999复合预混料中烟酸、叶酸的测定　高效液相色谱法.pdf

GB/r17813-1999 前 言 复合预混料中烟酸、叶酸的测定目前尚无国家标准和国际标准，本标准是在查阅国外文献的基础 上，经过试验比较选择了用高效液相色谱法测定复合预混料中烟酸、叶酸。该方法与美国公职分析化学 家协会(AOAC)方法比较，简便、快速，准确度、精密度效果相当。 本标准在技术内容上参照国外方法，确定了标准范围、试剂、测定条件，即反相离子色谱条件和反相 缓冲液系统条件。在编写格式上依据GB/T1.1-1993《标准化工作导则 第1单元:标准的起草与表述 规则 第1部分:标准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988((标准化工作导则 化学分析方法标准编写 规定》。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。 本标准主要起草人:陈必芳、李兰、梁冬生。 中华人民共和 国国家标准 复合预混料中烟酸、叶酸的测定 高效液相色谱法 GB/T 17813-1999 Determinationofnicotinicacidandfolicacid incompoundpremix- High-pressureliquidchromatography 1 范围 本标准规定了复合预混料中烟酸、叶酸的测定— 高效液相色谱法。 本标准适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。测量范围为每千克样品中含烟酸的 量在1000mg以上，含叶酸的量在500mg以上。 2 引用标准 下列标准中所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文 本标准出版时，所示版本 均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样中的烟酸、叶酸用水一甲醇一乙酸混合溶液提取，将滤液注人高效液相色谱反相柱上进行分离， 用紫外检测器在280nm波长处定量测定。 4 试剂和材料 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯.水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682的 规定 4.1 甲醇 :优级纯。 4.2 三乙胺 4.3 冰乙酸。 4.4 烷磺酸钠 (PICB6):cCCH,(CHr)5S0,Na)=0.005mol/I{或pCCH,(CH..),SO,NaI =941mg/I)。 4.5 标准溶液配制 4.5.1烟酸标准贮备液:称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0mg,`N.于250ml,棕色容量瓶中，用移动 相溶解，稀释至刻度，于冰箱保存，可放置一周。 4.5.2 叶酸标准贮备液:称取经过干燥的叶酸标准纯品25.0mg,.于250ml容量瓶中，用碳酸钠溶 液(4.8)溶解，调至pH7.。定容至刻度，于冰箱保存。 4.5.3烟酸、叶酸标准工作液 准确吸取4.5.1和4.5.2各10ML，用移动相稀释至50ml或100ML. 该混合标准溶液置于带盖小瓶贮存，供液相色谱仪分析用，当日使用。 国家质量技术监督局1999一08一10批准 2000一02一01实施 Gs/T 17813-1999 4.6 提取液:取500mL去离子水，加10mL冰乙酸((4.3),1.3ml三乙胺(4.2)，用去离子水定容至 1I，此时pH为3.2，过0.45pm滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇(4.1)混合 4.7磷酸缓冲液:称取4.84g的磷酸氢二钾(K,HP0,),9.82g磷酸二氢钾(KH,P04),溶于去离子水 中，加20ml乙腊，用去离子水定容至1L,混匀用2000氢氧化钾调节pH至6.50 4.8 碳酸钠溶液:c(Na,CO,.)=0.1mol/L. 5 仪器、设备 5.1 实验室常用仪器设备。 5.2 超声波水浴。 5.3 超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸馏器)。 5.4 离心机:3000r/min. 5.5 高效液相色谱仪:带自动进样器、紫外可调波长检验器。 6 试样制备 选取有代表性的样品至少500g，四