第二章 染色体与DNA-1幻灯片_1.pptVIP

第二章：染色体与DNA－1 一、DNA的一级结构 二、DNA的物理图谱 三、DNA一级结构的测定 四、DNA的双螺旋结构 五、DNA的三股螺旋结构 一、DNA的一级结构 4种核苷酸的连接及排列顺序 四种脱氧核糖核苷酸分别表示为： dAMP、dGMP、dTMP、dCMP（A、G、T、C） DNA分子的大小 分子量 碱基对（base pairs，bp） 三种表示方法 长度 三者的关系 分子量＝bp×660 D 每圈螺旋10.5bp ＝ 3.4nm 测量的方法：凝胶电泳、电镜金属投影 DNA分子的多样性 碱基的排列顺序，而构成了DNA分子的多样性 100bp DNA分子可能排列方式就是4100 DNA中的碱基排列顺序是DNA分子的重要属性 二、DNA的物理图谱 DNA分子的限制性内切酶酶解片段的排列顺序 假设有一段DNA片段为2450bp，分别有两个XbaI和两个PstI位点，这样每一个单酶切会把此DNA分子切成3个片段，双酶切将产生5个片段。 单酶切 XbaI PstI PstI XbaI 双酶切 XbaI PstI PstI XbaI PstI XbaI PxtI+XbaI 1400bp 1200bp 900bp 900bp 750bp 600bp 500bp 500bp 300bp 150bp 150bp 2450bp 750bp P 500bp P 1200bp 150bp 600bp 500bp 300bp x x 150bp 1400 900bp 三、DNA一级结构的测定 双脱氧末端终止法-Sanger法： 原理是采用核苷酸链终止剂，双脱氧核苷酸ddNTP终止DNA链的延长。 根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。 分成4组，每一组反应体系中加入4种dNTP和一种相应的ddNTP，反应后可得到不同长度的以双脱氧结尾的DNA片段，各DNA片段均只相差一个核苷酸长度，各组的片段经凝胶电泳分离后，每一片段的电泳位置不同，从下而上可直接读出DNA序列。 Sanger法测定DNA序列的原理图示 T A A T C T G C A G G C 5/------------A T T A G A C G T C C G ----------3/ A T G C ddATP ddTTP ddGTP ddCTP dATP