第二篇 血清总蛋白测定.docVIP

郧县中医院检验科 生化室作业指导书 文件编号：检验科-SH-01 版本/修订号：1/0 主题内容 血清总蛋白测定 生效日期：2011-5-20 第 1 页 共103页 血清总蛋白测定(双缩脲法) 1.实验原理：凡分子中含有两个甲酰氨基( -CONH2- )的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称双缩脲反应 。蛋白质分子中有许多肽键( -CONH-），都能起此反应，而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.紫色复合物在 540 nm 有吸收峰，并与蛋白含量成正比，通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。因此，在严格控制条件下，双缩脲反应可作为血浆蛋白总量测定的理想方法，从测定的吸光度值计算出蛋白质含量。吸光度的大小与试剂的组分、pH值、反应温度有关。 蛋白质 + 铜离子 NaOH 紫红色络合物 2.标本采集及存放：无特殊要求，最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。离心后采集血清或肝素抗凝的血浆。血清标本20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。 3.实验试剂及仪器： 3.1 试剂：使用北京利德曼总蛋白试剂盒。试剂组成如下 成 份 含 量 酒石酸钾钠 32mmol/L 硫酸铜 12mmol/L 碘化钾 30mmol/L NaoH 600mmol/L 3.2仪器及参数： 3.2.1使用凯美雅生化分析仪，具体的操作详见生化分析仪作业指导书. 3.2.2 分析参数： 主波长 540nm 分析方法 终点法 副波长 700nm 反应方向 向上 反应温度 37℃ S : R 5：300 4.质量控制：在测定每一批标本前先做正常值和异常值来两个水平的质控品，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程）。在控后方可进行标本测定，若失控，查明原因并采取措施。 5. 计算方法：样本总蛋白含量＝×C0 △At----------标本管的吸光度变化； △As----------标准管的吸光度变化； C0-----------标准液的浓度； 6. 参考值范围：健康成人走动后血清总蛋白浓度为 64～83 g/L ，健康成人静卧时，血清总蛋白浓度为 60～78 g/L。 7. 临床意义:血清总蛋白有生理性波动，直立体位由于体液分布的原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位相对稀释。因此长久卧床者血清 总蛋白比直立活动时约低3～5g/L；新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g/L；60岁以上老人约比成人低2g/L。 （1）总蛋白浓度增高：①血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高。凡体内水分的排出大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩，尤其是急性失水时(如岖吐、腹泻、 高热等)变化更为显著，血清总蛋白浓度有时可达100～ 150g/L， 又如休克时，由于毛细血管通透性的变化，血浆也可发生浓缩。慢性肾上腺皮质功能减退患者，由于钠的丢失而致继发性水分丢失，血浆也可出现浓缩现象。② 血清蛋白质合成增加。大多发生在多发性骨髓瘤患者，此时主要是球蛋白的增加，其量可超过 50g/L，总蛋白则可超过100g/L。 （2）血清总蛋白浓度降低：①血浆中水分增加，血浆被稀释。如因各种原因引起的水钠潴留。②营养不良和消耗增加。长期食物中蛋白含量不足或慢性肠道疾病所引起的吸收不良.使体内缺乏合成蛋白质的原料，或因长期患消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺功能亢进和恶性肿瘤等，均可造成血清总蛋白浓度降低。③合成障碍，主要是肝功能障碍。肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白蛋白的下降最为显著。④蛋白质丢失。严重烫伤时，大量血浆渗出，或大出血时，大量血液的丢失;肾病综合征时，尿液中长期丢失蛋白质;溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定量的蛋白质.这些均可使血清总蛋白浓度降低。 8.附注： ⑴干扰因素：①胆红素≤40mg/dl，血红蛋白≤200mg/dl, 抗坏血酸≤50mg/dl,乳糜1.6%时对检测结果没有影响。②酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响双缩脲的测定结果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论上这些干扰均可吸光度太高，可影响测定的准确性。 ⑵方法局限性：本试剂线性上限为100g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷注意事项: ①血清蛋白质的含量一般用 g/L