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慢病毒 Cas9 表达系统使用说明
本说明书用于：
构建 Cas9 蛋白表达细胞系
在 Cas9 蛋白表达细胞系中敲除目的基因
适用于以下产品
货号 货号
pLV‐Cas9 载体系列 CR2001，CR2002
pLV‐Cas9‐Nick 载体系列 CR2003，CR2004
pGR 载体系列 CR2011~CR2013
pGR‐EGFP 载体系列 CR2014~CR2016
北京英茂盛业生物科技有限公司
北京市昌平区沙河镇青年创业大厦 B‐916
Tel ：010
Emai：order@
Web site ：
产品说明书
目录
1、产品简介 2
1.1CRISPR/gRNA 基因敲除原理 2
1.2 慢病毒 Cas9 表达系统特点 2
2、Cas9 表达慢病毒制备 3
2.1 试剂准备 3
2.2 简要实验流程 4
2.3 实验前准备 4
2.4 病毒制备步骤 5
2.4 PEG 纯化慢病毒 6
3、筛选 Cas9 表达稳定细胞株 7
3.1 试剂 7
3.2 实验前准备 7
3.3 筛选细胞系实验步骤 8
3.4 Cas9 表达细胞系检测 9
4 、用 pTYNE 载体对 Cas9 表达细胞系进行验证 10
4.1 验证 Cas9 蛋白表达细胞系 10
4.2 验证 Cas9Nicknase 蛋白表达细胞系 11
5、pGR 和 pGR‐EGFP 载体构建 13
5.1 pGR 和 pGR‐EGFP 载体图谱 13
5.2 靶点设计 13
5.3 pGR 载体构建步骤 14
附录 1 用到的产品 17
附录 2 引物列表 17
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