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第一章 绪论 1生物技术：以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理，生产生物制品和创造具有特定性状的新品系或新品种的科学技术。 2园艺植物生物技术：以园艺植物为材料，利用生物技术，创造或改良种质或生产生物制品的一门技术，它是园艺学与生物技术的交叉技术学科，是在植物组织培养、植物细胞工程、植物染色体工程、植物基因工程、生物信息学等现代生物技术手段基础上产生和发展起来的。 第二章 植物组织培养 1 组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物的胚胎、器官、组织、细胞、原生质体等（外植体）进行离体培养，使其再生发育为完整植株的技术。 2 细胞全能性：植物体的每一个细胞都带有一套完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 3 脱分化：植物离体的器官、组织、细胞在培养条件下，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态，形成无组织结构的愈伤组织或细胞团的过程。 4 再分化：由脱分化状态再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官甚至最后再生成完整植株的过程。 5 胚状体：离体培养条件下，由植物的体细胞分化形成的类似于合子胚的结构。 6 园艺植物组织培养的意义： 在育种方面 单倍体育种（花药培养以及小孢子培养是获得单倍体以及纯和二倍体材料的最佳途径）；培育远缘杂种和体细胞杂交；筛选突变体；转基因育种；种植资源的保存。 在工厂化育苗上 利用脱除病毒或无病毒材料在离体条件下快速繁殖，可以解决短期内提供大批量、规格一致的种苗，提高了繁殖效率，也优化了运输的方式。 在有用次生产物中的应用 药物（人参皂苷、三七皂苷元）；蛋白质（饲料、食品工业）。 在植物遗传、生理生化和植物病理研究中的应用。 7再分化（植株再生）的三条途径：器官发生（通过茎尖培养产生大量腋芽，通过愈伤组织培养先诱导产生不定芽，通过愈伤组织培养先诱导产生不定根，不经过愈伤组织直接产生器官原基。）、胚胎发生、原球茎发生。 ??8培养基的组成成分及其配制： 培养基的成分：1）无机营养 16种植物必需元素 C 、H、 O、 N、 P、 S、 K、 Ca、 Mg、 Fe、 Mn、 Cu、 Zn、 B、 Mo、 Cl ； 2)有机营养 糖类、维生素类、肌醇、氨基酸、有机附加物； 3）植物生长调节剂 IAA和CTK类； 4）琼脂 一般在6-10g/L；5）水；6）活性炭。 培养基的配制：1）配制培养基母液： 大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物、植物生长调节剂 ；2）称量蔗糖，加水至总体积的3/4，溶解之；3）根据计算所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊的附加物，混匀后定容；4）调PH值为5.8至6.0；5）分装、封口；6）灭菌。 9 外植体的灭菌技术：流水冲洗10-20分钟或更长时间→70-75%酒精中浸泡30秒→0.1-0.2%氯化汞溶液中浸泡10分钟左右或在10%的次氯酸钠饱和漂白粉溶液中浸泡30分钟左右→蒸馏水冲洗4-5次→备用 10 组织培养的步骤：外植体的选择，外植体的消毒，外植体的原代培养，试管苗的增殖与继代培养，试管苗的生根，试管苗的炼苗，试管苗的移栽与田间管理。 第三章 细胞工程（原生质体培养与体细胞杂交技术） 1 原生质体：除去细胞壁的细胞或一个被质膜包围的裸露细胞。 2 亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体叫亚原生质体。 3 核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。 4 胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 5 原生质体分离常用的酶及其作用： 纤维素酶类 果胶酶类 半纤维素酶 6 原生质体纯化的方法：沉降法、漂浮法、界面离心法。 7 原生质体培养的方法：1）液体浅层培养，将含有原生质体的培养液在培养皿底部铺一薄层，封口后进行暗培养。（优）操作简单，细胞的植板率高；（缺）原生质体容易发生粘连，难于选出单细胞无性系，难于定点观察。 2）固体平板培养，混合后含有原生质体的培养基铺于培养皿底部，封口后进行培养 （优）可定点观察，易于统计原生质体分裂频率；（缺）操作要求严格，植板率低。 3）固液双层培养，在培养皿底部铺一层琼脂糖固体培养基，再将原生质体悬浮液滴于固体培养基表面。（优）原生质体分布均匀有利于分裂，易获得单细胞株系，细胞植板率高；（缺）原生质体易破碎。 4）琼脂糖珠培养，把含有原生质体的琼脂糖培养基切成块放到大体积的液体培养基中，并在旋转摇床上震荡培养以利于通气。改善了培养物的通气和营养环境，促进了原生质体的分裂和细胞团的形成，提高了原生质体的植板率。 8 影响原生质体培养以及植株再生的因素：基因型、原生质体的来源、起始培养密度与培养基、培养条件与培养方法、渗透压调节剂 9 原生质体研究的意义：1）原生质体可作为细胞无性系变异和突变体筛