生化测量系统校准,南京121216教材.ppt

生化测量系统的校准 南通大学附属医院 王惠民 一、与校准相关的一些基本问题 校准（Calibration）重要吗？ 实验室中测量不合格约15%由校准误差所致 临床医生往往认为检验结果的“不准”是由不正确的校准造成的 陈文祥主任认为，检验结果互认的前提是： 测量结果是否具有可比性（溯源，方法性能评价：校准） 可比性的标准 参考测量区间（一致化问题） 校准受到重视了吗？ 一般由组长进行校准 一般无SOP，或SOP不够详细 CLSI或去其他的国际组织尚未有相应的标准或指南 一般的实验室无校准的记录 科主任一般不过问校准的正确与否 校准什么？ 测量仪器？测量系统（“调标”或“定标”）？ 测量仪器：单独或与辅助设备组合，用于测量的装置。 测量系统：由一台或多台测量仪器所组成的用于特定测量的成套系统，包括试剂和电源等。 校准实际上就是将测量系统与“参考系统”进行比较，并将测量系统调整至参考系统相一致水平的过程。 为什么用校准品后得到的K值与理论K值不一致？ 校准品是如何定值的？ 方法不一样（参考方法） 仪器不一样（最好的仪器，每次定值前都必须对仪器进行校准） 试剂不一样（最好的试剂） 二、校准前的准备 1.生化分析仪的准备 生化分析仪的校准或检定 生化分析仪的性能验证 2.试剂的准备 试剂是否获准入 试剂的性能验证 3.水的准备 1.生化分析仪的准备 生化分析仪的校准或检定 由厂家根据其标准对生化分析仪进行校准 由有关计量部门根据国家标准（JJG494-2005）对仪器进行检定 生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析仪检定规程JJG 494-2005进行） 零点漂移 波长准正确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距 生化分析仪检定用标准物质 用于吸光度正确度与重复性检定的标准物质 杂散光检定的标准物质 吸光度线性检定的标准物质 交叉污染检定的标准物质 中国计量科学研究院，北京市北三环东路18号，电话：01064278838 零点漂移 开机30min, 用蒸馏水调吸光度至0.000处，10min内吸光度的最大变化值应符合下表规定： 出现零点飘移可能原因 电压不稳 光电倍增管或光接收元件老化 仪器灵敏度过高 仪器设计与制造的缺陷 波长的正确度 波长正确度的测定方法根据分光原理不同而异 分光式仪器（光栅由于不需传动调节波长，一般不需校准） 低压汞灯、氘灯、干涉滤光片 镨钕滤光片、氧化钬滤光片 滤光式仪器 将滤光片拆下在已校准的分光光度计上进行波长扫描，测定波长和半波宽 一般仪器不容易拆卸 特征谱线 低压汞灯: 253.7nm 氘灯: 486nm、656.1nm 镨钕滤光片: 529nm、808nm（400nm～900nm内至少有10个吸收峰） 氧化钬滤光片: 200～700nm共12条谱线 干涉滤光片: 长波通滤光片: 200～1100nm，光学分辨率为1nm 短波通滤光片: 400～700nm，光学分辨率为1nm 波长的重复性 指多次波长测试数据的离散性，或者多次波长测试数据的符合程度。 一般取波长正确度的3次测试结果中最大值与最小值之差作为波长重复性。 波长正确度及重复性的要求（nm） 杂散光 杂散光与波长的半波宽有关，半波宽越大，杂散光越多。 测定50g/L亚硝酸钠（NaNO2）标准溶液相对于蒸馏水在340nm处的吸光度，了解杂散光的多少。 亚硝酸钠溶液的配制方法 将分析纯亚硝酸钠固体试剂放入称量瓶置于烘箱中，在箱温为105±5℃下烘2h，取出置于干燥器中冷却至室温，在分析天平上（精度为0.1mg）精确称取10g，置于200mL烧杯中，用小半杯蒸馏水溶解后移入200mL容量瓶中，以少量蒸馏水冲洗烧杯三次，均倒入容量瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度线反复摇匀，置于阴凉干燥处备用。 杂散光 1）在波长340nm，第一个试剂位放入蒸馏水，以蒸馏水为样本，重复测定5次吸光度值；第二个试剂位放入NaNO2溶液，以NaNO2溶液为样本，重复测定5次吸光度值；或将蒸馏水和NaNO2溶液分别加入同一比色杯读取吸光度（可消除比色杯误差），重复测定5次，共得5个蒸馏水和5个NaNO2溶液的吸光度。 2）最小NaNO2溶液吸光度-最大蒸馏水吸光度≥2.3。 吸光度正确度 指吸光度实际测定值与理论值之差，该偏差越小吸光度正确度越高，间接说明波长的正确度与杂散光的多少。 1）国家标准物质法