3-4-定性定量方法.pptVIP

* 牛黄解毒片是由牛黄、雄黄、冰片等8味药组成的中成药制剂，其中冰片由龙脑、异龙脑组成，具有开窍醒神，清热止痛等作用，其含量的多少直接影响药品的疗效。 §2-4 定性定量方法 色谱定性分析方法 1. 纯物质保留值 2. 相对保留值（α） 3. 保留指数（I） 色谱定性、定量分析方法 色谱定量分析方法 1. 归一化法 2. 外标法 3. 内标法 纯物质保留值定性法 标准物对照法 将样品和标准物在相同的色谱条件下进样分析，初步定性样品中与标准品保留时间相同的色谱峰组分 改变柱温 若在3个以上不同柱温条件下，它们的保留时间也相同，它们为同一化合物的概率≥75％ 更换固定液 若在2个以上的不同固定液以及不同柱温的条件下，保留时间完全相同，它们为同一物质的概率≥90％ 标准物加入法 为克服色谱系统的波动对保留时间的影响，在样品中加入标准物，与原样品的色谱图对比，确定色谱峰增高的组分从而定性。 标准物对照进行定性分析示意图 已知纯物质： a.甲醇； b.乙醇； c.正丙醇； d.正丁醇； e.正戊醇 定量分析方法 直接定量法 无需待测化合物的标准品 ◆ 标准系数法 采用文献资料提供的该化合物响应值 ◆ 归 一 化 法 视所有组分的响应值均相同 校正定量法 需要已知纯度的化合物建立定量基准 ◆ 自身校正 用待测化合物的标准品求其校正因子 ◆ 对照校正 以某个化合物的校正因子为定量的基准 1. 峰面积的测量 （1）峰高（h）乘半峰宽（Y 1/2）法： A = 1.064 h·Y1/2 （2）峰高乘平均峰宽法：当峰形不对称时使用 A = h·（Y 0.15 + Y 0.85 ）/ 2 （3）峰高乘保留时间法： 在一定操作条件下，同系物的半峰宽与保留时间成正比，对于难于测量半峰宽的窄峰、重叠峰（未完全重叠），可用此法。 A = h·tR （4）自动积分和微机处理法 试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即： 2. 定量校正因子 ⑴ 样品中所有组分已分离并都被检测出 ⑵ 所有组分的校正因子均相同，即 则组分 i 的百分含量即等于其面积的百分数。即： 3.归一化法 校正定量法 标准曲线法 一点校正法 ◆ 外 标 法(绝对校正因子法) ◆ 内 标 法(相对校正因子法) 仪器分析中,定量分析通常采用的是标准品校正法 先测定标准品获得待测成分的校正因子 f ，然后再定量分析 简单 应用广泛 抗干扰能力弱 精密度不稳定 复杂 要求特殊 抗干扰能力强 精密度较高 原理 方法 特点 ⑴ 测定待测组分的标准品溶液，求得校正因子 f ； ⑵ 再测试供试品，用校正因子对被测组分的峰面积进行校正，计算含量 ⑴ 校正因子 ⑵ 含量 4.外 标 法 1）单点校正法 例1 苯标准品溶液为1.204 ug/ml,进样2ul,苯峰面积为6048.取排放废液5L,用正己烷萃取,得100 ml供试品溶液,进样3ul,测得其苯的峰面积3695，问该废液达到苯≤0.01ppm的排放标准否? 废液中苯的浓度 C＝c×100(ug)/5×103(g）＝0.00981(ppm) ⑴ 求苯的校正因子 f＝1.204×2/6048＝0.0003981 ⑵ 供试品溶液中苯的浓度 c＝f×3695/3＝0.4904 （ug/ml） 解 ◆ 标准品和样品是分别两次进样分析的，色谱系统的状态难以完全相同 准确性和精密度取决于色谱系统的稳定性和进样量的准确 ◆ 手动进样时，进样体积受温度、计量读数、进样操作等因素的影响，波动较大 单点校正法的缺点 C 1 A 1 C 2 A 2 C 3 A 3 C 4 A 4 C 5 A 5 配制标准溶液 C 1～C5 测试标准溶液 A 1～A 5 绘制标准曲线 计算回归方程 A＝b·C＋a R2≥0.995 峰面积 C 2）标准曲线法 向含待测物(Ci)的溶液中加入内标物(Cs)， 采用这种方法作定量分析，其准确性和精密度与进样的体积是否准确是无关的。 5.内标法 （1）为试样中不含有的纯物质； （2）与被测组分性质比较接近； （3）不与试样发生化学反应； （4）加入的量应与被测组分的量接近； （5）出峰位置应在被测组分附近，且无组分峰影响。 内标物要求 ⑴ 测定待测物和内标物的标准品溶液，求得校正因子 f ； ⑵ 测试供试品，用校正因子对被测