非转录区序列改建提高毕赤酵母表达抗菌肽-第二军医大学学报.PDFVIP

第 二 军 医 大 学 学 报 ! # .//01’.2 3. $ $ 34.5 ! ! !#$% ’ ()* (’$ +,)- !论 著! ! 非转录区序列改建提高毕赤酵母表达抗菌肽 !# $$#% 3 . 3 3 4 3 3 陆建荣 !王惠民 !吴 萍 !黄松平 !常秋月 !凌勇武 !倪晓蓉 ! 南通市第三人民医院感染病实验室%南通 ! 南通大学附属医院检验科%南通 ! 南通市中心血站%南通 36 ..7//7 .6 ..7//3 46 # ..7//7 !摘要 目的探讨 非转录区! 序列改建对毕赤酵母表达外源蛋白 的影响# 方法去除毕赤酵母分泌表达 89: 89:+; ==:40 ! 质 内 序列$转化 $构建改良的毕赤酵母分泌表达载体 % 鉴定及测 ?@A589:+; BB!;AA!! !#$%1C8 ?@A5:D1@; ?A ! 序确认后与酵母偏爱密码子编码的 基因片段连接$构建改良的重组表达载体 %原生质球法转化毕赤 ==:40 ?@A5:D1@;:==:40 酵母 $ 扩增鉴定后诱导 表达$筛选最佳表达条件$对表达产物进行凝胶电泳和 印迹分析%比较转入 B338 ?A ==:40 E’FG’H, ?@A5:D1@;:==:40及 ?@A5:==:40后毕赤酵母表达产物的抑菌活性$间接测定改建前后==:40蛋白表达量的变化# 结果 鉴定及测序证实 改建成功$成功构建重组载体 %转化毕赤酵母后表达产物 鉴定出 ?A ?@A5:D1@; ?@A5:D1@;:==:40 ?A 基因$最佳诱导甲醇