骨髓瘤细胞you导的骨髓间充质干细胞Cx43表达变化及其在多发性骨髓瘤发病中的作用.docVIP

博士学位论文 论文题目 骨髓瘤细胞诱导的骨髓间充质干细胞 Cx43 表达变化及其在多发性骨髓瘤发病中的作用 研究生姓名 指导教师姓名 专 业 名 称 张晓慧 傅晋翔 内科学血液病 研 究 方 向 多发性骨髓瘤的基础和临床 论文提交日期 2014年 3月 本研究所获的基金资助 国家自然科学基金81272631） 骨髓瘤细胞诱导的骨髓间充质干细胞 Cx43表达变化及其在多发性骨髓瘤发病中的作用 中文摘要 骨髓瘤细胞诱导的骨髓间充质干细胞 Cx43表达变化及 其在多发性骨髓瘤发病中的作用 中文摘要 多发性骨髓瘤（MM）是浆细胞在骨髓中异常增生的恶性肿瘤，这些异常增生的 浆细胞与骨髓基质细胞密切相关。MM细胞与骨髓微环境可通过直接接触及分泌细胞 因子的方式间接相互作用。在 MM的发展过程中，骨髓微环境逐渐表现出支持 MM 细胞生存和增殖的特征。骨髓间充质干细胞（ BMSCs）参与构建骨髓微环境，参与 促进 MM细胞的生长及骨破坏的发生；同时，MM细胞对骨髓微环境重塑使其成为 适合 MM细胞生存和增殖场所。目前，此过程中涉及的具体机制尚未完全阐明。 间隙连接是普遍存在的一种细胞间连接方式，相邻细胞间通过间隙连接介导的细 胞间隙连接通讯(GJIC)进行着信息和能量物质的交换，对细胞增殖、分化等生理过 程起着重要的调控作用。间隙连接蛋白 43(Cx43)是在人体表达最高的一种间隙连接物 质，可在包括造血干细胞、基质细胞等多种细胞表达，参与造血调控。Cx43表达及 功能异常在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。那么在 MM的发生、发展中， MM细胞及 BMSCs如何相互作用，是否发生间隙连接的表达或功能改变，其改变又 有怎样的生物学效应？我们通过建立 MM细胞与 BMSCs的共培养体系，研究 MM 细胞对 BMSCs Cx43表达及功能的影响以及此过程中 MM细胞及 BMSCs的生物学行 为的变化，从而进一步探讨 MM的发病机制。 本课题为国家自然科学基金项目（NO H1616）“接头蛋白Cx43在多发 性骨髓瘤成骨细胞巢重塑中的作用”的重要研究内容，该实验完成为此项目的结题、 文章发表及延伸课题的申报奠定基础。 I 中文摘要 骨髓瘤细胞诱导的骨髓间充质干细胞 Cx43表达变化及其在多发性骨髓瘤发病中的作用 第一部分 Cx43在骨髓瘤细胞和骨髓间充质干细胞的 表达及生物学功能 目的：检测人 MM细胞及 BMSCs的 Cx43表达，探讨间隙连接在 BMSCs诱导 的 MM细胞的迁移、粘附中的作用及其对 BMSCs的基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α） 分泌的影响。 方法：贴壁培养法分离培养人 BMSCs，CD138磁珠及 midi MACs分选原代 MM 细胞，流式细胞仪测定 BMSCs及原代 MM细胞的免疫表型。Westernblot及免疫荧光 检测 Cx43在 BMSCs的表达。CCK-8法检测间隙连接阻断剂 18α-甘草次酸（18α-GA） 对 MM细胞及 BMSCs增殖的作用；微孔隔离实验检测 18α-GA对 BMSCs诱导的 MM 细胞迁移、粘附能力的影响。ELISA检测 BMSCs SDF-1α分泌水平。 结果：1）MM细胞系 RPMI8226、U266及 1例原代 MM细胞中、低度表达 Cx43， XG-4、XG-7细胞不表达 Cx43。BMSCs高表达 Cx43。初诊 MM患者的 BMSCs （MM-MSC）Cx43表达高于正常供者的 BMSCs（ND-MSC）。2）18α-GA对 RPMI8226 细胞和 BMSCs的增殖无明显影响。3）18α-GA抑制 BMSCs的 SDF-1α分泌，其作 用前后 SDF-1α浓度分别为（237.84±9.23）pg/ml、（94.31±6.44）pg/ml（P0.01）。 4）18α-GA可抑制 BMSCs诱导的 MM细胞迁移，BMSCs经其作用前后 RPMI8226 细胞迁移率分别为（8.0±0.673）%及（4.82±0.186）%(P0.01)，XG-7的细胞迁移率 分别为（0.88±0.036）%、（0.58±0.020）%（P0.05）。5）18α-GA可抑制 MM细胞 在 BMSCs的粘附，其作用前后 RPMI8226细胞粘附率分别为（16.967±1.55）%、 （11.1±0.819）%（P0.05），XG-7的细胞粘附率分别为（9.5±1.323）%、（6.63±0.551） %（P0.05）。 结论：BMSCs及部分 MM