动物实验技术的方法.ppt

（6）腹水的采集： 主要利用腹膜腔穿刺术。动物取立位保定，穿刺点在腹下剑状软骨后方，旁开正中线，小动物在脐稍后方正中线上或正中线侧方 1～2cm 处。穿刺时，先将穿刺部位剪毛消毒，再将皮肤稍向一侧移，用注射器或穿刺套管针与腹壁垂直刺入。针尖有落空感后，腹水将自行流出。如若腹水量较大的，应缓慢地间歇地放出，以免腹内压突然下降而致使动物发生循环功能障碍。采完腹水后用碘酊棉球涂布。 （7）动物骨髓的采集 　　大动物骨髓的采集通常用活体穿刺法。多为胸骨、肋骨、股骨等骨的骨髓。小动物因骨骼小，不易穿刺采集，多用处死后采集的办法。一般采集胸骨和股骨骨髓。 导尿法采集　用导尿管插入尿道，在消毒和无菌操作情况下，可采到无污染的尿液。或者将动物麻醉后，使膀胱和尿道括约肌松驰，再插入导尿管收集尿液。 动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象， 此时应立即进行急救处理措施。 急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因（如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施急救措施。 一、呼吸、心跳（血压）的改变 动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指标，二者是实验动物状态的主要指征。尤其对呼吸的观察，因为动物的死亡首先是呼吸的停止。 （一）诱发原因 麻醉给药速度过快或过量：实施静脉给药麻醉，可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此，为防止麻醉剂过量，注射速度一定不要过快，严密观察动物状况，若需追加麻醉剂，一次不宜超过总量的1/5 气道不畅或堵塞：常见于麻醉后，因为气管分泌物增多或气管切开的出血凝块堵塞气管，动物呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息 大失血：如因大动脉插管的松脱所造成的大失血。 实验药物的作用：如静脉注射乙酰胆碱过量或动物对其反应过强，引起心搏减弱减慢，继而出现呼吸、心跳的停止。 （二）急救措施 迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清除干净气管、气管插管内的分泌物及血凝块。必要时拔出气管插管冲洗后再进行气管插管手术。 根据下列不同情况采取相应的急救措施： （1）呼吸极慢、不规则，但心跳正常时：给予人工呼吸-压胸法，适合给予苏醒剂。 （2）呼吸停止仍有心跳时：1）实施人工呼吸，必要时可使用人工呼吸机或吸氧（吸入气中O2占95%，CO2占5%）；2）注射50%葡萄糖液5-10ml；3）给肾上腺素及苏醒剂。 （3）呼吸、心跳均停止时：用1:10000肾上腺素溶液心内注射，其余同（2） 二、大失血 （一）诱发原因 多因动脉插管结扎不牢、动物挣扎，导致大动脉插管的松脱，或在进行动脉插管手术时，因未放置动脉夹或动脉夹夹闭不全而剪切动脉引起。 （二）急救措施 1.立即止血：应迅速手指压迫或捏住出血点（尽量不要用止血钳，以防损伤动脉和神经），然后仔细检查分离出血点，于近心端放置动脉夹，再行动脉插管术。 2.补充血容量：若失血太多，适当加快输液（生理盐水）速度，增加血容量。 3.注射强心剂：静脉注射1:10000肾上腺素0.5ml 动物经外科手术、药物或放射线等实验因素处理后，机体受到不同程度的操作损伤或刺激，有些系统功能失调。若管理不当，会发生不利于实验目的的变化，干扰实验结果。有的甚至会导致死亡，严重影响实验。因此，加强实验后观察管理十分重要，实验后观察管理应注意以下几点： ① 温度和湿度 温度和湿度对实验后动物影响明显，特别是外科手术刚结束时，动物往往仍处于麻醉状态。动物因麻醉后代谢减慢，体温降低，应注意及时调整好室内温度，应比正常室温提高3～5℃。对于仍处于麻醉状态的动物，应铺盖1层棉织物，以利于动物保温，防止感冒。观察室内禁止温度急剧变化，冷热温差应控制在±2℃以内。观察室内湿度也应控制在70％以下，以减少潮湿刺激。 ② 洁净度 观察室内洁净度对受试动物也有很大影响。有些实验，如器官移植同时使用大剂量的免疫抑制剂，导致动物免疫功能严重下降，受试动物极易感染，特别是呼吸系统极易受空气中病菌侵袭。空气中的浮游菌含量越高，感染程度越大。创伤部位也一样。因此，实验观察室应设置通风净化系统，且应运转良好，保证室内达到标准的洁净要求。动物的铺垫物也应经常更换，每天最好更换1次。更换时减少尘埃飞扬。铺垫物应柔软、吸水、无尘粒，同时应消毒、灭菌。 ③ 光照和噪音 术后观察室内应控制光照，一般宜暗淡些，减少刺激，切忌强光照明。为便于观察可借助手电筒或局部光源。观察室应保持安静，实验人员在室内观察的动作宜轻，不能喧哗或制造突发的噪声。 继发伤口感染是动物术后极易发生的情况，严重的可致败血症引起死亡。 除严格消毒器械和创口、控制污染源外，每天注