动物实验技术的方法.ppt

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动物实验技术的方法

(6)腹水的采集: 主要利用腹膜腔穿刺术。动物取立位保定,穿刺点在腹下剑状软骨后方,旁开正中线,小动物在脐稍后方正中线上或正中线侧方 1~2cm 处。穿刺时,先将穿刺部位剪毛消毒,再将皮肤稍向一侧移,用注射器或穿刺套管针与腹壁垂直刺入。针尖有落空感后,腹水将自行流出。如若腹水量较大的,应缓慢地间歇地放出,以免腹内压突然下降而致使动物发生循环功能障碍。采完腹水后用碘酊棉球涂布。 (7)动物骨髓的采集   大动物骨髓的采集通常用活体穿刺法。多为胸骨、肋骨、股骨等骨的骨髓。小动物因骨骼小,不易穿刺采集,多用处死后采集的办法。一般采集胸骨和股骨骨髓。 导尿法采集 用导尿管插入尿道,在消毒和无菌操作情况下,可采到无污染的尿液。或者将动物麻醉后,使膀胱和尿道括约肌松驰,再插入导尿管收集尿液。 动物实验过程中,可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象, 此时应立即进行急救处理措施。 急救处理措施首先要迅速排查原因,并中断诱因(如止血、停药、排除分泌物等),然后对症实施急救措施。 一、呼吸、心跳(血压)的改变 动物实验过程中,需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化,一者它们是实验反应的数据指标,二者是实验动物状态的主要指征。尤其对呼吸的观察,因为动物的死亡首先是呼吸的停止。 (一)诱发原因 麻醉给药速度过快或过量:实施静脉给药麻醉,可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此,为防止麻醉剂过量,注射速度一定不要过快,严密观察动物状况,若需追加麻醉剂,一次不宜超过总量的1/5 气道不畅或堵塞:常见于麻醉后,因为气管分泌物增多或气管切开的出血凝块堵塞气管,动物呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息 大失血:如因大动脉插管的松脱所造成的大失血。 实验药物的作用:如静脉注射乙酰胆碱过量或动物对其反应过强,引起心搏减弱减慢,继而出现呼吸、心跳的停止。 (二)急救措施 迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清除干净气管、气管插管内的分泌物及血凝块。必要时拔出气管插管冲洗后再进行气管插管手术。 根据下列不同情况采取相应的急救措施: (1)呼吸极慢、不规则,但心跳正常时:给予人工呼吸-压胸法,适合给予苏醒剂。 (2)呼吸停止仍有心跳时:1)实施人工呼吸,必要时可使用人工呼吸机或吸氧(吸入气中O2占95%,CO2占5%);2)注射50%葡萄糖液5-10ml;3)给肾上腺素及苏醒剂。 (3)呼吸、心跳均停止时:用1:10000肾上腺素溶液心内注射,其余同(2) 二、大失血 (一)诱发原因 多因动脉插管结扎不牢、动物挣扎,导致大动脉插管的松脱,或在进行动脉插管手术时,因未放置动脉夹或动脉夹夹闭不全而剪切动脉引起。 (二)急救措施 1.立即止血:应迅速手指压迫或捏住出血点(尽量不要用止血钳,以防损伤动脉和神经),然后仔细检查分离出血点,于近心端放置动脉夹,再行动脉插管术。 2.补充血容量:若失血太多,适当加快输液(生理盐水)速度,增加血容量。 3.注射强心剂:静脉注射1:10000肾上腺素0.5ml 动物经外科手术、药物或放射线等实验因素处理后,机体受到不同程度的操作损伤或刺激,有些系统功能失调。若管理不当,会发生不利于实验目的的变化,干扰实验结果。有的甚至会导致死亡,严重影响实验。因此,加强实验后观察管理十分重要,实验后观察管理应注意以下几点: ① 温度和湿度 温度和湿度对实验后动物影响明显,特别是外科手术刚结束时,动物往往仍处于麻醉状态。动物因麻醉后代谢减慢,体温降低,应注意及时调整好室内温度,应比正常室温提高3~5℃。对于仍处于麻醉状态的动物,应铺盖1层棉织物,以利于动物保温,防止感冒。观察室内禁止温度急剧变化,冷热温差应控制在±2℃以内。观察室内湿度也应控制在70%以下,以减少潮湿刺激。 ② 洁净度 观察室内洁净度对受试动物也有很大影响。有些实验,如器官移植同时使用大剂量的免疫抑制剂,导致动物免疫功能严重下降,受试动物极易感染,特别是呼吸系统极易受空气中病菌侵袭。空气中的浮游菌含量越高,感染程度越大。创伤部位也一样。因此,实验观察室应设置通风净化系统,且应运转良好,保证室内达到标准的洁净要求。动物的铺垫物也应经常更换,每天最好更换1次。更换时减少尘埃飞扬。铺垫物应柔软、吸水、无尘粒,同时应消毒、灭菌。 ③ 光照和噪音 术后观察室内应控制光照,一般宜暗淡些,减少刺激,切忌强光照明。为便于观察可借助手电筒或局部光源。观察室应保持安静,实验人员在室内观察的动作宜轻,不能喧哗或制造突发的噪声。 继发伤口感染是动物术后极易发生的情况,严重的可致败血症引起死亡。 除严格消毒器械和创口、控制污染源外,每天注

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